[發明專利]基于番茄灰葉斑病抗性基因Sm的CAPS分子標記、引物、檢測方法、檢測試劑盒與應用有效
| 申請號： | 202011378178.1 | 申請日： | 2020-11-30 |
| 公開（公告）號： | CN112266976B | 公開（公告）日： | 2022-01-28 |
| 發明（設計）人： | 楊歡歡;姜景彬;劉明月;許向陽;李景富;趙婷婷;張賀;孫要光;王鶴璇 | 申請（專利權）人： | 東北農業大學 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 哈爾濱市偉晨專利代理事務所(普通合伙) 23209 | 代理人： | 榮玲 |
| 地址： | 150030 黑龍*** | 國省代碼： | 黑龍江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 基于 番茄 葉斑病 抗性 基因 sm caps 分子 標記 引物 檢測 方法 試劑盒 應用 | ||
1.一種番茄灰葉斑病抗性植株的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：
步驟一、以待測番茄材料的基因組DNA為模板，利用基于番茄灰葉斑病抗性基因Sm的CAPS分子標記的擴增引物進行PCR擴增，所述擴增引物的核苷酸序列為：
正向引物序列：5’-GTCCGAGCAACATAGCTCCC-3’、
反向引物序列：5’-ATGGACCAACCTTGCAAACG-3’；
步驟二、經PCR擴增所得擴增產物經限制性內切酶TaqⅠ酶切，當酶切獲得長度分別為589bp和208bp的兩條特異性譜帶時，待測番茄材料為番茄灰葉斑病抗性植株；當酶切獲得長度分別為589bp、208bp和797bp的三條特異性譜帶時，待測番茄材料為番茄灰葉斑病抗性植株；當酶切獲得的是長度為797bp的一條特異性譜帶時，待測番茄材料為番茄灰葉斑病感性植株。
2.根據權利要求1所述一種番茄灰葉斑病抗性植株檢測方法，其特征在于，步驟一所述PCR擴增的反應體系為：1μL正向引物，1μL反向引物，1μL模板DNA，10μL 2×Taq PCRStarMix，7μL dd H2O。
3.根據權利要求1或2所述一種番茄灰葉斑病抗性植株檢測方法，其特征在于，步驟一所述PCR擴增的擴增程序為：首先94℃預變性2min；其次94℃變性30s，57.5℃退火30s，72℃延伸40s，35個循環；最后72℃延伸5min；保存溫度4℃。
4.根據權利要求3所述一種番茄灰葉斑病抗性植株檢測方法，其特征在于，步驟二所述限制性內切酶TaqⅠ酶切的酶切體系為：TaqI 0.6μL，10×Taq I Buffer 1.2μL，0.1％BSA1.2μL，PCR產物2μL，滅菌水5μL，酶切條件為65℃孵育6小時。
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