[發明專利]一種檢測大鼠外周血HDAC5表達水平的試劑盒及其使用方法

在審

• 申請號: 202011376896.5
• 申請日: 2020-11-30
• 公開（公告）號: CN112342281A
• 公開（公告）日: 2021-02-09
• 發明（設計）人: 李文強;蘇璽;宋盟;邵明龍;劉青;張露文;呂路線
• 申請（專利權）人: 河南省精神病醫院（新鄉醫學院第二附屬醫院）
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供一種檢測大鼠外周血HDAC5基因表達的試劑盒及其使用方法，通過該試劑盒，篩選孕期感染青春期子代外周血單核細胞HDAC5表達量明顯上調的大鼠繼續飼養至成年期進行行為檢測(開放曠場實驗、Y迷宮實驗以及前脈沖抑制效率(PPI))，結果顯示，HDAC5顯著升高的大鼠其成年期行為也顯著異常，如焦慮水平增加、記憶缺陷及感覺門控功能障礙等，據此推斷本試劑盒可以有效評估孕期感染青春期子代的模型質量，并用以后續研究。

技術領域

本發明屬于外周血檢測技術領域，具體涉及一種檢測大鼠外周血HDAC5表達水平的試劑盒及其使用方法。

背景技術

通過制備孕期感染子代大鼠模型，檢測青春期(出生后35天)及成年期(出生后56天)海馬、前額葉皮質及外周單核細胞中HDAC5的表達水平，并結合行為學分析，發現外周血單核細胞中HDAC5升高早于異常行為出現，故而，可將HDAC5作為評估孕期感染子代大鼠模型質量的早期外周標記分子。但在檢測HDAC5表達水平時操作較為繁瑣，因此，急需一種可檢測大鼠外周血單核細胞HDAC5表達水平的試劑盒。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術的不足，提供一種檢測大鼠外周血HDAC5表達水平的試劑盒及其使用方法，具體方案如下：

一種檢測大鼠外周血HDAC5表達水平的試劑盒，該試劑盒所包含的試劑及使用說明如下表所示：

表中：引物Ⅰ：GTCGAAAGGATGGCACTGTT(HDAC5上游)

引物Ⅱ：AGCCAGTAAAGCCGTTCTCA(HDAC5下游)

引物Ⅲ：GGAGCGAGATCCCGTCAAGA(GAPDH上游)

引物Ⅳ：CACAAACATGGGGGCATCAG(GAPDH下游)。

一種基于上述試劑盒的使用方法，其包括如下操作流程：

第一步：外周血單核細胞的分離

取肝素抗凝血5mL，沿管壁徐徐滴流疊加在盛有5mL溶液a的試管內，應注意保持兩者界面清晰，在室溫下以2000r/min的速度離心20min，用毛細吸管輕輕吸出乳白色的單核細胞；

第二步：單核細胞RNA的抽提

步驟(1)：收集到的單核細胞加入1000μL的溶液b，室溫放置5min；

步驟(2)：加入200μL的溶液c，渦旋混勻15sec；

步驟(3)：室溫放置10min后，在4℃的環境下，12000g離心15min；

步驟(4)：取上清，加入等體積的溶液d，顛倒混勻10余次；

步驟(5)：室溫靜置10min，在4℃的環境下，在4℃的環境下，12000g離心15min；

步驟(6)：棄上清，加入1mL 75％溶液e(溶液e使用溶液f稀釋配置)，洗滌沉淀RNA；

步驟(7)：4℃，7500g離心5min，重復步驟(6)-步驟(7)；

步驟(8)：棄上清，于超凈工作臺中干燥5min；

步驟(9)：加入適量溶液f(20～50μL)溶解RNA，置于55℃水浴10min，轉彈管壁，離心；

步驟(10)：用Nanodrop2000紫外分光光度計測量RNA純度及濃度，確保OD260/280比值在1.8-2.0之間；

步驟(11)：根據測定濃度稀釋，用溶液f稀釋2μg RNA至20μL體系即為上樣模板；