[發明專利]一種旋毛蟲競爭ELISA抗體檢測試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 202011376831.0
• 申請日: 2020-11-30
• 公開（公告）號: CN112505333B
• 公開（公告）日: 2022-05-31
• 發明（設計）人: 劉曉雷;劉明遠;白雪;楊勇;王學林;丁靜;劉琰
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/543;G01N33/577;G01N33/535
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 鄧宇

一種旋毛蟲競爭ELISA抗體檢測試劑盒及其檢測方法，屬于血清學免疫檢測技術領域。為了更穩定、準確檢測多宿主旋毛蟲感染，本發明提供了一種旋毛蟲競爭ELISA抗體檢測試劑盒，所述試劑盒含有：底板包被有旋毛蟲Ts?WN10重組抗原的96孔反應板，生物素標記的單克隆抗體Ts?WN10?1H9溶液，辣根過氧化氫酶HRP標記的親和素溶液，洗滌液，TMB顯色底物，終止液，和陰性質控；其中，所述陰性質控為濃度為1μg/mL的生物素標記的單克隆抗體Ts?WN10?1H9溶液。本發明制備的試劑盒具有特異性強、靈敏度高等特點，可用于豬/鼠/人等多宿主旋毛蟲病的抗體檢測。

技術領域

本發明屬于血清學免疫檢測技術領域，具體涉及一種旋毛蟲競爭ELISA抗體檢測試劑盒及其檢測方法。

背景技術

旋毛蟲病是一種危害非常嚴重的人獸共患病，其不但可給畜牧業生產造成巨大的經濟損失，而且對人類身體健康也構成巨大威脅，人或動物主要通過生食或半生食含有旋毛蟲的肉類(主要為豬肉)而發病。

對于屠宰動物旋毛蟲病的檢驗，國際動物衛生組織(OIE)的法規檢驗方法為鏡檢法及集樣消化法，目前我國也在延用這兩種方法。然而以上兩方法均存在一定的弊端，鏡檢法費時費力而且敏感性差，其敏感性為肉中蟲體密度達到每克3條蟲體時方可檢出。集樣消化法雖可大大提高檢出率，將蟲體檢出率提高至每克肉1條蟲體，但該方法仍十分繁瑣，在發現陽性樣品時仍需對陽性組采用消化法進行逐頭檢測。從敏感性的角度來看，由鏡檢法和集樣消化法所造成漏檢的肉類均存在安全隱患并可引起人類的感染(攝入75條蟲體即可引起人的感染)。國內外學者對旋毛蟲血清學檢測的方法進行了大量的研究。目前，旋毛蟲肌幼蟲排泄分泌物ES抗原是OIE及國際旋毛蟲委員會推薦的用于血清學抗體檢測的標準抗原。基于ES抗原的間接ELISA檢測方法的靈敏度達到每克肉0.01條蟲體，可以用于旋毛蟲感染的診斷。然而ES抗原成分復雜，制備繁瑣并嚴格依賴于活體動物，生產周期長、批內和批間的質控十分困難，而且存在交叉反應等問題，因而阻礙了其實際應用。

人類感染旋毛蟲主要是通過生食或半生食含有感染性幼蟲的圈養動物(主要是豬)的肉類，因此監控畜群的旋毛蟲感染水平對于防控人類感染十分重要。旋毛蟲在圈養動物內的循環感染主要由肉類殘渣的飼喂活動和偶然地嚙齒類的捕食活動造成。因此，對于嚙齒類-豬群-人類食物鏈上各個宿主的感染防控都顯得十分重要。然而，基于ES抗原的間接ELISA試劑盒需要根據宿主的不同制備不同的試劑盒組分，無法實現一個方法通用型地檢測多個宿主。目前也尚未有多宿主通用型的旋毛蟲抗體檢測試劑盒。

除ES抗原，已有研究表明對感染后6h的旋毛蟲cDNA表達文庫中進行免疫學篩選，獲得了一個高豐度強反應原性的抗原蛋白，并將其命名為WN10，該蛋白編碼半胱氨酸蛋白酶抑制劑。WN10基因注冊號：EU263325，WN10蛋白注冊號：ABY60755。此外，研究者發現進一步免疫印記和間接ELSIA表明原核表達的重組Ts-WN10抗原可以被豬感染旋毛蟲感染17天、25天和60天血清所識別，表明Ts-WN10是旋毛蟲血清學檢測的理想候選抗原，可以用來改進血清學檢測方法。

固相競爭ELISA檢測技術(cELISA)是在單克隆抗體技術基礎上發展起來的一種免疫學檢測技術。常規固相競爭ELISA是在96孔微孔板上包被抗原，待檢血清與單克隆抗體競爭結合微孔板底的抗原，再用HRP標記的抗單抗的二抗進行信號檢測，但由于單克隆抗體在物種來源上的限制(主要是小鼠和兔)，只能用于非單抗物種來源的宿主檢測項目中。近年來，抗體標記技術取得了較大發展，已經能夠將單抗標記上生物素，采用生物素-親和素系統進行信號檢測，可以擺脫單抗物種的限制。目前已報道的旋毛蟲病抗體檢測ELISA方法中，包括有間接ELISA和一個競爭ELISA方法，且均采用肌幼蟲排泄分泌物ES抗原。

發明內容

為了更穩定、準確檢測多宿主旋毛蟲感染，本發明提供了一種旋毛蟲競爭ELISA抗體檢測試劑盒，所述旋毛蟲競爭ELISA抗體檢測試劑盒含有：

底板包被有旋毛蟲Ts-WN10重組抗原的96孔反應板，