[發明專利]一種旋毛蟲競爭ELISA抗體檢測試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 202011376831.0
• 申請日: 2020-11-30
• 公開（公告）號: CN112505333B
• 公開（公告）日: 2022-05-31
• 發明（設計）人: 劉曉雷;劉明遠;白雪;楊勇;王學林;丁靜;劉琰
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/543;G01N33/577;G01N33/535
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 鄧宇

1.一種旋毛蟲競爭ELISA抗體檢測試劑盒在制備旋毛蟲競爭ELISA抗體的多宿主檢測試劑盒中的應用，其特征在于，所述旋毛蟲競爭ELISA抗體檢測試劑盒含有：

底板包被有旋毛蟲Ts-WN10重組抗原的96孔反應板，

用0.9％NaCL溶液稀釋到2μg/mL的生物素標記的單克隆抗體Ts-WN10-1H9溶液，

辣根過氧化氫酶HRP標記的親和素溶液，

洗滌液，

TMB顯色底物，

終止液，

和陰性質控；

其中，所述陰性質控為濃度為1μg/mL的生物素標記的單克隆抗體Ts-WN10-1H9溶液；

所述單克隆抗體Ts-WN10-1H9是由雜交瘤細胞株WN10-1H9制備的，所述雜交瘤細胞株WN10-1H9的微生物保藏編號為CGMCC No.18316；

所述板底包被有旋毛蟲Ts-WN10重組抗原的96孔反應板的制備步驟為：

步驟一、將旋毛蟲Ts-WN10重組抗原用CBS緩沖液稀釋至3μg/mL，96孔反應板中每孔包被100μL稀釋后的重組抗原，于4℃包被16h；

步驟二、包被后的反應板棄去多余的包被液，每孔加入300μL PBST洗滌液，洗滌3次，每次1min；

步驟三、每孔加入300μL含1％BSA的PBST封閉液，于37℃封閉1h；

步驟四、棄去封閉液，每孔加入300μL PBST洗滌液，洗滌3次，每次1min；

所述旋毛蟲競爭ELISA抗體的多宿主檢測試劑盒的使用方法為：

(1)取50uL待測血清和50uL濃度為2μg/mL的單克隆抗體Ts-WN10-1H9溶液，混勻，加入到板底包被有旋毛蟲Ts-WN10重組抗原的96孔反應板中，于37℃反應1h，在板內平行設立陰性質控對照；

(2)用PBST洗滌液洗滌3次后，每孔加入100uL經含1％BSA的PBST溶液稀釋的HRP標記的親和素，于37℃反應30min；

(3)再用PBST洗滌液洗滌3次；

(4)每孔加入100uL TMB顯色底物，于37℃顯色8min后終止，讀取陰性質控450nm處吸光度值OD_NC以及待檢血清450nm處吸光度值OD_sample；

(5)然后計算抑制率PI％＝(1-OD_sample/OD_NC)％：

對于豬血清樣品，當待測樣品PI％≥52％時，則判定為陽性；

當待測樣品PI％＜52％時，則判定為陰性；同時OD_NC≥1.00，則判定為實驗成立；

對于小鼠血清樣品，當待測樣品PI％≥39％時，則判定為陽性；

當待測樣品PI％＜39％時，則判定為陰性；同時OD_NC≥1.00，則判定為實驗成立；

對于人血清樣品，當待測樣品PI％≥41.12％時，則判定為陽性；

當待測樣品PI％＜41.12％時，則判定為陰性；同時OD_NC≥1.00，則判定為實驗成立。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述辣根過氧化氫酶HRP標記的親和素溶液為eBioscenceTM Avidin-HRP。

3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述TMB顯色底物為 TMB單組分顯色液。

4.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述終止液為濃度為2M的H₂SO₄溶液。