[發明專利]一種紫點海葵酶解多肽的制備方法及其應用

有效

• 申請號: 202011374405.3
• 申請日: 2020-11-30
• 公開（公告）號: CN112458138B
• 公開（公告）日: 2023-05-05
• 發明（設計）人: 高炳淼;袁琳;符金星
• 申請（專利權）人: 海南醫學院
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/34;A61K38/01;A61P35/00
• 代理公司: 海南漢普知識產權代理有限公司 46003
• 代理人: 劉建芳

1.一種紫點海葵酶解多肽的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、預處理：收集紫點海葵，洗凈后剪碎，超聲破碎至溶液渾濁，置于有機溶劑浸泡去脂，沖洗、瀝干，得到紫點海葵樣品；

S2、海葵總蛋白的提取：取步驟S1的紫點海葵樣品，加入混合后的?RIPA?裂解液與PMSF蛋白酶抑制劑，靜置20-40min后超聲破碎至溶液渾濁；低溫離心，收集上清液得到粗品，真空冷凍干燥，制得海葵蛋白凍干粉；

S3、酶解：取步驟S2的海葵蛋白凍干粉用純水溶解，加入堿性蛋白酶，進行酶解，酶解后煮沸滅活，得到酶解產物經超濾管離心，收集濾液，冷凍干燥，制得紫點海葵多肽；

步驟S3中，所述酶解條件為：加入酶量2000~4000U/g，酶解溫度為50~60°C，pH為8~9、時間為4~6h；所述超濾管的過濾的分子量為3kDa。

2.根據權利要求1所述的紫點海葵酶解多肽的制備方法，其特征在于，步驟S3中，所述堿性蛋白酶的酶解條件為：?加酶量為4000?U/g?、pH=8?、溫度為60℃、時間為6h。

3.根據權利要求1所述的一種紫點海葵酶解多肽的制備方法，其特征在于，步驟S1中，所述有機溶劑為異丙醇，所述去脂的具體操作為浸泡于有機溶劑中去脂，每4h更換一次，連續換3次，再用純水將有機溶劑沖洗干凈。

4.根據權利要求1所述的紫點海葵酶解多肽的制備方法，其特征在于，步驟S2中，所述RIPA?裂解液與PMSF蛋白酶抑制劑的體積比為95~105：1。

5.根據權利要求1所述的紫點海葵酶解多肽的制備方法，其特征在于，步驟S2中，所述低溫離心為2-5°C、9000-11000r/min離心4-6min。

6.根據權利要求1所述的紫點海葵酶解多肽的制備方法，其特征在于，步驟S3中，酶解后煮沸滅活10-20min。

7.根據權利要求1中所述的紫點海葵多肽應用于制備抗結腸癌藥物。