[發(fā)明專利]一種高靈敏度肌酸激酶同工酶檢測試劑盒及其制備方法

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• 申請日: 2020-11-30
• 公開（公告）號: CN112540177A
• 公開（公告）日: 2021-03-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄒繼華;田燕丹;劉獻文;方亮
• 申請（專利權(quán)）人: 美康生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N33/577;G01N33/543
• 代理公司: 寧波甬致專利代理有限公司 33228
• 代理人: 李迎春

1.一種高靈敏度肌酸激酶同工酶檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括試劑R1和試劑R2；

所述試劑R1成分及含量為：第一緩沖液10-200mM，無機鹽5-30g/L，增濁劑2-40g/L，表面活性劑0.01-3g/L，第一防腐劑0.5-1.53g/L，阻斷劑1-3g/L，溶劑為純化水；

所述試劑R2包括膠乳微球試劑和膠乳保存液；所述膠乳微球試劑為偶聯(lián)有至少兩種鼠抗人CK-MB單克隆抗體的膠乳微球；所述膠乳保存液成分及含量為：第二緩沖液10-200mM，穩(wěn)定劑30-150g/L，第二防腐劑0.3-1g/L，溶劑為純化水。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高靈敏度肌酸激酶同工酶檢測試劑盒，其特征在于，所述第一緩沖液為三羥甲基氨基甲烷緩沖液、4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液、磷酸鹽緩沖液、甘氨酸緩沖液、2-(N-嗎啡啉)乙磺酸緩沖液、3-(N-嗎啉基)-2-羥基丙磺酸緩沖液中的一種；

所述無機鹽為氯化鈉、氯化鎂、氯化鉀、氯化鋅、氯化鈣中的一種或幾種；

所述增濁劑為PVP、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、葡聚糖中的一種或幾種；

所述表面活性劑為吐溫-20、吐溫-80、曲拉通X-100中的一種或多種；

所述第一防腐劑為Proclin300和疊氮化鈉中的一種或幾種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高靈敏度肌酸激酶同工酶檢測試劑盒，其特征在于，所述第二緩沖液為三羥甲基氨基甲烷緩沖液、4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液、磷酸鹽緩沖液中的一種；

所述穩(wěn)定劑為BSA、蔗糖、海藻糖、甘露醇、甘油、羧甲基纖維素鈉、明膠中一種或多種；

所述防腐劑為Proclin300、硫柳汞、疊氮化鈉中一種。

4.一種高靈敏度肌酸激酶同工酶檢測試劑盒制備方法，包括以下步驟：

試劑R1制備：稱取無機鹽5-30g/L，增濁劑2-40g/L，表面活性劑0.01-3g/L，第一防腐劑0.5-1.53g/L，阻斷劑1-3g/L，將上述組分溶于10-200mM第一緩沖液中，充分攪拌促進溶解，加純化水混合均勻，并調(diào)整pH為7.0-7.8，制得試劑R1；

試劑R2制備：首先將抗鼠IgG-Fc抗體與膠乳微球表面氨基反應(yīng)形成shiff堿，使抗鼠IgG-Fc抗體定向標記于膠乳微球上，再將抗鼠IgG-Fc抗體與至少兩種鼠抗人CK-MB單克隆抗體連接，使膠乳微球偶聯(lián)上鼠抗人CK-MB單克隆抗體，制得膠乳微球試劑，然后將膠乳微球試劑加入封閉緩沖液重懸超聲后進行封閉，再加入膠乳保存液重懸超聲制得膠乳試劑，至少兩種膠乳試劑混合制成試劑R2。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種高靈敏度肌酸激酶同工酶檢測試劑盒，其特征在于，所述抗鼠IgG-Fc抗體與鼠抗人CK-MB單克隆抗體的摩爾比為1-2:1。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種高靈敏度肌酸激酶同工酶檢測試劑盒，其特征在于，所述抗鼠IgG-Fc抗體定向標記的膠乳微球為氨基聚苯乙烯膠乳微球，直徑為100-350nm。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種高靈敏度肌酸激酶同工酶檢測試劑盒，其特征在于，所述定向標記技術(shù)采用高碘酸鈉氧化法將抗鼠IgG-Fc抗體Fc端糖鏈鄰二醇氧化為醛基，與膠乳微球上的氨基形成shiff堿。