[發明專利]一種具有防治草地貪夜蛾功能的微生物菌劑及其制備方法

在審

• 申請號: 202011373320.3
• 申請日: 2020-11-30
• 公開（公告）號: CN112352792A
• 公開（公告）日: 2021-02-12
• 發明（設計）人: 趙崇鈞;楊潤霞;毛明林;李誠;何月秋;郭紹青;趙榮彪
• 申請（專利權）人: 云南省微生物發酵工程研究中心有限公司
• 主分類號: A01N63/22
• 分類號: A01N63/22;A01P7/04;C12N1/20;C12R1/125
• 代理公司: 昆明鴻昊知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 53211
• 代理人: 陳芃綦

1.一種具有防治草地貪夜蛾功能的微生物菌劑，其特征在于：包括以下重量份的組分：離心菌體45～55份、助劑35～40份、離心菌體上清液10～15份；其中,所述離心菌體中的菌體為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)WSWFJ38，保藏號為CGMCC No.20143。

2.根據權利要求1所述的具有防治草地貪夜蛾功能的微生物菌劑，其特征在于：所述的助劑包括以下重量份的組分：潤濕分散劑17～20份、增稠劑3～5份、非離子表面活性劑12～15份。

3.根據權利要求1所述的具有防治草地貪夜蛾功能的微生物菌劑，其特征在于：所述的潤濕分散劑以下重量份的組分：羧甲基纖維素鈉(EMA)10份、萘磺酸鹽(D425)5份、吐溫(20)4.8份中的任一種或兩種以上的組合。

4.根據權利要求1所述的具有防治草地貪夜蛾功能的微生物菌劑，其特征在于：所述的非離子表面活性劑包括以下重量份的組分：三苯乙烯基苯酚聚氧乙烯醚磷酸酯8份、烷基酚聚氧乙烯醚(OP-10)4份、聚乙二醇(PEG600)2.2份中的任一種或兩種以上的組合。

5.一種權利要求1～4任一項所述的具有防治草地貪夜蛾功能的微生物菌劑制備方法，包括菌體制備、菌液制備和菌液成品步驟，其特征在于：具體步驟為

1)菌體制備，取菌種經LB培養基活化、發酵料培養基發酵、離心分離得到離心菌體；

2)菌液制備，取步驟1)制得的離心菌體、助劑、離心菌體上清液混合攪拌均勻得到菌液；

3)菌液成品，取步驟2)制得的菌液加入稀釋劑稀釋得到枯草芽孢桿菌菌懸液成品，即為防治草地貪夜蛾功能的微生物菌劑。

6.根據權利要求5所述的具有防治草地貪夜蛾功能的微生物菌劑制備方法，其特征在于：所述的步驟1)中的菌種活化方式為將-80℃下保存的枯草芽孢桿菌菌株在LB固體培養基上活化12～16h，得活化的菌株。

7.根據權利要求5所述的具有防治草地貪夜蛾功能的微生物菌劑制備方法，其特征在于：所述的步驟1)中的發酵方式為取活化的菌株接種LB液體培養基中，在溫度為35℃、轉速為160rpm/min條件下培養24h，得種子液；再把種子液與培養液以體積比為1：120的比例接入到發酵料培養基中，在溫度為36.5℃～37.5℃條件下，轉速為120rpm/min條件下培養25～30h，得菌料發酵液。

8.根據權利要求5所述的具有防治草地貪夜蛾功能的微生物菌劑制備方法，其特征在于：所述步驟1)中

當所述LB培養基為LB液體培養基時，pH＝6.8～7.5，包括以下重量份的組分：細菌學蛋白胨1份、酵母提取粉0.5份、氯化鈉1份、水95份；

當所述LB培養基為LB固體培養基時，pH＝6.8～7.5，包括以下重量份的組分：細菌學蛋白胨1份、酵母提取粉0.5份、氯化鈉1份、瓊脂粉24份、水73.5份。

9.根據權利要求5所述的具有防治草地貪夜蛾功能的微生物菌劑制備方法，其特征在于：所述步驟1)中發酵液培養基包括以下重量份的組分：黃豆粉1.0～1.6份、蔗糖0.1～0.5份、蛋白胨0.2～0.6份、玉米粉0.2～0.6份、碳酸鈣0.3～0.9份、魚粉0.1～0.3份、硫酸銨0.01～0.08份、硫酸鎂0.02～0.05份、磷酸二氫鉀0.01～0.04份、磷酸氫二鉀0.02～0.05份、硫酸錳0.01～0.04份、氫氧化鈉0.01～0.04份、氯化鈉0.02～0.03份、消泡劑0.5～1.5份，用鹽酸及氫氧化鈉調節pH至6.8～7.5。

10.根據權利要求5所述的具有防治草地貪夜蛾功能的微生物菌劑制備方法，其特征在于：所述的步驟3)制得的枯草芽孢桿菌菌懸液成品，即防治草地貪夜蛾功能的微生物菌劑中的有效活菌數不小于2.0×10⁸cfu/mL。