[發明專利]一種可德蘭多糖-季銨化殼聚糖結合物納米顆粒及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202011373040.2
• 申請日: 2020-11-30
• 公開（公告）號: CN112451659B
• 公開（公告）日: 2022-09-23
• 發明（設計）人: 王鳳山;姜紅蕾;張舒;陳逸攀;王瓏坤
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K39/12;A61P31/16;B82Y5/00;C08B37/08
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 宋海海

本發明提供一種可德蘭多糖?季銨化殼聚糖結合物納米顆粒及其制備方法和應用，屬于疫苗佐劑制備技術領域。本發明制備得到一種性質穩定、能夠很好地吸附抗原的可德蘭多糖?季銨化殼聚糖結合物納米顆粒，該納米顆粒形態均一，穩定性佳，能夠長期保存；同時，其能夠荷載流感抗原到達作用部位，并達到免疫佐劑的效果，提高疫苗的免疫效果。因此，可作為黏膜(如鼻腔)流感疫苗等的免疫佐劑使用，具有良好的實際生產和應用之價值。

技術領域

本發明屬于疫苗佐劑制備技術領域，具體涉及一種可德蘭多糖-季銨化殼聚糖結合物納米顆粒及其制備方法和應用。

背景技術

公開該背景技術部分的信息僅僅旨在增加對本發明的總體背景的理解，而不必然被視為承認或以任何形式暗示該信息構成已經成為本領域一般技術人員所公知的現有技術。

流行性感冒是由流感病毒引起的一種高傳染性急性呼吸道疾病。據世界衛生組織估計，全球每年由于季節性流感導致患嚴重疾病的人高達350萬，并導致29萬-65萬人死亡。流感病毒具有高致病性、高致死率以及容易發生抗原漂移等特點，現今還未研發出有效治療其感染的抗病毒藥物。因此，進行疫苗接種仍然是流感防治的最主要手段。

目前，國際上上市使用的流感疫苗大多都是流感滅活疫苗。雖然滅活疫苗具有較好安全性，但是其免疫效果差，需要多次接種，使用的抗原量大。由于流感病毒主要通過呼吸道黏膜部位感染人體，鼻腔免疫疫苗能夠模擬機體自然感染過程，從第一防線抵御病毒感染，能夠同時誘導黏膜免疫應答和系統免疫應答，這使鼻腔免疫疫苗也成為了流感疫苗主要研究方向。但是，這些疫苗研發過程中存在著鼻腔免疫效果差且免疫原性差，這需要合適的免疫佐劑來輔助疫苗產生免疫效果。現有常于流感疫苗的佐劑在新型疫苗研究中存在許多問題，鋁佐劑在鼻腔免疫時不能充分激發抗原的免疫反應或者免疫效果差，副作用明顯，這些都影響了其在流感疫苗中的使用。因此，開發新型的佐劑以彌補傳統佐劑的不足已迫在眉睫。大量研究證明，多糖能夠作用于免疫系統，引起強而廣泛的免疫應答，并且具良好的生物相容性，低毒。某些多糖更具有良好的載體性能，可以很好地荷載抗原進入機體。因此，多糖佐劑為鼻腔免疫流感疫苗的研究提供了更多可能。

可德蘭多糖(curdlan)能刺激巨噬細胞NF-κB的活化，但是其溶解性較差。前期研究表明，將水溶性的硫酸化可德蘭多糖和6-O-2-羥丙基三甲基氯化銨殼聚糖(OHTCC)制備形成納米粒在體外實驗中能夠提高免疫細胞的功能，引起交叉遞呈。荷載模式抗原OVA對小鼠滴鼻給藥后，能夠很好的提高免疫應答和血清中IgG、IgA的水平，改善OVA引發的Th2型免疫偏差。但是，發明人發現，這種納米顆粒需要現配現用，穩定性不易保障。

發明內容

針對現有技術存在的不足，本發明提供一種可德蘭多糖-季銨化殼聚糖結合物納米顆粒及其制備方法和應用。本發明制備得到一種性質穩定、能夠很好地吸附抗原的可德蘭多糖-季銨化殼聚糖結合物納米顆粒，從而可將其應用于鼻部流感疫苗，經試驗證明，可德蘭多糖-季銨化殼聚糖結合物納米粒可以能夠穩定長期保存并且荷載流感抗原到達作用部位，并達到免疫佐劑的效果，提高疫苗的免疫效果。基于上述研究結果，從而完成本發明。

具體的，本發明涉及以下技術方案：

本發明的第一個方面，提供一種可德蘭多糖-季銨化殼聚糖結合物納米顆粒的制備方法，所述制備方法包括：將6-O-季銨化殼聚糖加入(優選采用滴加方式進行)活化后的琥珀酰化可德蘭多糖中混合均勻純化后得可德蘭多糖-季銨化殼聚糖(C-O)結合物固體。

本發明的第二個方面，提供上述制備方法制得的可德蘭多糖-季銨化殼聚糖結合物納米顆粒。經試驗證明，該納米顆粒的粒徑為190.53±4.22nm，PDI為0.216±0.032，形態比較均一；Zeta電位為15.93±1.29mV，能穩定存在6周，因此具有較好的穩定性。

本發明的第三個方面，提供上述可德蘭多糖-季銨化殼聚糖結合物納米顆粒在制備疫苗中的應用。