[發(fā)明專利]一種利用苧麻BnXTH2基因提高辣椒抗寒能力的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011372775.3
• 申請(qǐng)日: 2020-11-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112481296B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-12-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 揭雨成;馬玉申;揭紅東;邢虎成;佘瑋
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/84
• 分類號(hào): C12N15/84;A01H5/00;A01H6/82
• 代理公司: 北京科億知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

本發(fā)明公開(kāi)了一種利用BnXTH2基因提高植物抗寒能力的方法，所述方法具體為將BnXTH2基因在辣椒中異源表達(dá)。實(shí)驗(yàn)證明，通過(guò)將BnXTH2基因在辣椒體內(nèi)異源表達(dá)可明顯提高辣椒抗寒能力。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利用苧麻BnXTH2基因提高辣椒抗寒能力的方法。

背景技術(shù)

辣椒(Capsicum anmuum L.)是一種重要的喜溫性蔬菜,在北方保護(hù)地種植面積較大,但由于冬季溫度低,光照弱,影響了北方地區(qū)辣椒的生產(chǎn)。苗期越冬易受突然寒流低溫(0℃以下)霜凍或早春陰雨低溫(0℃以上)的冷害,嚴(yán)重影響辣椒的生長(zhǎng)、早期產(chǎn)量和商品性。急需一種增強(qiáng)辣椒抗寒冬的一種技術(shù)。

近期的研究發(fā)現(xiàn)XTH5/7過(guò)表達(dá)(oxXTH5、ox XTH7)轉(zhuǎn)基因植物在低溫處理下植株存活率實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，過(guò)表達(dá)XTH基因能夠促進(jìn)辣椒細(xì)胞壁中半纖維素的積累從而增強(qiáng)植株抗凍性。番茄XTH3基因也發(fā)現(xiàn)與植物抗寒性相關(guān)。

利用BnXTH2基因增強(qiáng)辣椒抗寒能力，可以有效解決辣椒抗寒的問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明旨在提供一種利用苧麻BnXTH2基因提高辣椒抗寒能力的方法，經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)表明，利用苧麻BnXTH2基因可以有效提高辣椒的抗寒能力。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種利用苧麻BnXTH2基因提高辣椒抗寒能力的方法，所述方法具體為將苧麻BnXTH2基因在辣椒中過(guò)表達(dá)。

進(jìn)一步地，所述方法包括如下步驟：

S1、BnXTH2基因過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建；

1.1)提取整株的總RNA并反轉(zhuǎn)錄為cDNA；

1.2)以步驟1.1)得到的cDNA為模板，采用引物BnXTH2-F和BnXTH2-R進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到帶酶切位點(diǎn)的BnXTH2的開(kāi)放閱讀框；

BnXTH2-F:CGGGATCCATGAGATCATCATCAAGTAGT；

BnXTH2-R:CGAGCTCCTAGTAGCCAGCGAGGCACT；

1.3)將表達(dá)載體pBI 121和BnXTH2片段進(jìn)行酶切，酶切體系如下：

37℃反應(yīng)過(guò)夜，凝膠電泳膠回收目的PCR片段；

1.4)采用T4連接酶將步驟1.3)中得到的PCR片段與載體片段連接，具體體系如下：

16℃反應(yīng)過(guò)夜，進(jìn)行大腸桿菌轉(zhuǎn)化；

1.5)質(zhì)粒提取：

將步驟1.4)中成功轉(zhuǎn)化大腸桿菌采用質(zhì)粒提取試劑盒進(jìn)行質(zhì)粒提取；

1.6)轉(zhuǎn)化EHA105：

利用步驟1.5)提取得到的質(zhì)粒進(jìn)行農(nóng)桿菌EHA105轉(zhuǎn)化；

S2、對(duì)辣椒進(jìn)行農(nóng)桿菌侵染轉(zhuǎn)化及組織培養(yǎng)：

2.1)接種農(nóng)桿菌至含Rif+Kan的YEP液體培養(yǎng)基中，搖菌至OD＝1.5；

2.2)4℃離心后加入含0.3％AS的1/2MS液體培養(yǎng)基重懸，使其OD＝0.5；

2.3)將辣椒帶子葉胚軸下胚軸進(jìn)行農(nóng)桿菌浸染后共培養(yǎng)2d后，轉(zhuǎn)移至MS+6-BA3mg/L+NAA 0.8mg/L+Tim 300mg/L+Kan100mg/L愈傷培養(yǎng)基上，每14d更換培養(yǎng)基直至長(zhǎng)出叢生芽；