[發明專利]一種基于S1蛋白的檢測流行QX型雞傳染性支氣管病毒抗體的間接免疫熒光試劑盒

在審

• 申請號: 202011371468.3
• 申請日: 2020-11-30
• 公開（公告）號: CN112630427A
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發明（設計）人: 葉建強;路浩;尹朝憬;武佳妍;謝菁;張建軍;邵紅霞;秦愛建
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;C12N15/50;C12N15/85;C12N5/10;C07K14/165
• 代理公司: 揚州蘇中專利事務所(普通合伙) 32222
• 代理人: 沈志海

本發明公開了一種基于S1蛋白的檢測流行QX型雞傳染性支氣管病毒抗體的間接免疫熒光試劑盒，該試劑盒包括表達S1蛋白的LMH細胞，FITC標記的羊抗雞抗體，樣品稀釋液，洗滌液。本發明試劑盒具有良好的特異性；該試劑盒不僅能用于QX型雞傳染性支氣管病毒感染狀況流行病學調查，而且能有效用于監測免疫雞群QX型雞傳染性支氣管病毒抗體水平，用于評價免疫保護性抗體水平等。

技術領域

本發明涉及一種基于S1蛋白的檢測流行QX型雞傳染性支氣管病毒抗體的間接免疫熒光試劑盒，屬于生物技術檢測領域。

背景技術

傳染性支氣管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)屬于冠狀病毒科Coronaviridae)，冠狀病毒屬,根據臨床可分為呼吸型、生殖道型、腎型、腸型、腺胃型和變異型等。該病以咳嗽、氣管啰音和打噴嚏為主要特征，是對我國養雞業危害最為嚴重的病毒性傳染病之一，該病幾乎在世界范圍內所有的養雞國家存在，在我國的流行呈上升趨勢。IBV血清型眾多，變異迅速，IBV不同毒株間自然重組可以產生新的毒株，進而導致新的基因型或血清型的出現。流行病學表明，近年來我國依然以QX型IBV或與QX型IBV的重組毒占主流。然目前尚無針對QX型IBV血清學抗體檢測的快速方法及其試劑盒。因此開發一種高效、準確的針對QX型IBV血清學檢測方法尤為重要。S蛋白位于病毒粒子最表層的囊膜上，主要是構成病毒纖突。S蛋白同時包含有S1和S2兩個亞基，都屬于糖蛋白，介導病毒感染敏感細胞。S1亞基高度變異，而且主要形成S蛋白的外功能區及形成其外部球狀結構，在介導病毒感染細胞中具有重要作用。因此，本發明克隆表達QX型IBV的S1，并利用表達S1蛋白檢測針對QX型IBV的抗體對QX型IBV的流行病學檢測，為臨床上疫苗使用提供指導性意義。

發明內容

本發明的目的在于克服上述現有技術的不足，提供一種基于S1蛋白的檢測流行QX型雞傳染性支氣管病毒抗體的間接免疫熒光試劑盒，本發明的原理和最核心的關鍵技術是構建了QX型雞傳染性支氣管病毒S1蛋白基因真核表達質粒，并將轉染該質粒的表達S1蛋白的LMH細胞作為抗原建立試劑盒，檢測QX型雞傳染性支氣管病毒特異性抗體。

本發明的目的是這樣實現的，一種基于S1蛋白的檢測流行QX型雞傳染性支氣管病毒抗體的間接免疫熒光試劑盒，其特征在于，包括表達S1蛋白的LMH細胞、FITC標記的羊抗雞抗體、樣品稀釋液、洗滌液；

所述表達S1蛋白的LMH細胞，是轉染S1蛋白真核表達質粒的表達QX型雞傳染性支氣管病毒S1蛋白的LMH細胞；所述表達S1蛋白的LMH細胞，通過下述步驟得到：

(1)、QX型雞傳染性支氣管病毒S1蛋白真核表達質粒構建：以pcDNA3.1真核表達載體以及QX型雞傳染性支氣管病毒的RNA反轉錄的cDNA為模板，以SEQIDNO.1-2的序列為引物PCR擴增出線性化pcDNA3.1載體，以SEQIDNO.3、SEQIDNO.4的序列為引物PCR擴增出QX型雞傳染性支氣管病毒S1蛋白基因SEQIDNo.5；隨后利用重組酶ExnaseTMII將線性化的pcDNA3.1載體以及QX型雞傳染性支氣管病毒S1蛋白基因的PCR產物進行快速體外重組克隆，重組克隆經序列驗證后，命名為pcDNA3.1-IBV-34-S1；并用IFA驗證S1蛋白在LMH細胞中的表達；

其中：

SEQ ID NO.1為：

上游引物：GAATTCTGCAGATATCCAGCACAGTG；

SEQ ID NO.2為：

下游引物：GCTCGGTACCAAGCTTAAGTTTAAACG；

SEQ ID NO.3為：

上游引物：AGCTTGGTACCGAATGTTGGGGAAGTCACTGT；

SEQ ID NO.4為：