[發明專利]一種基于S1蛋白的檢測流行QX型雞傳染性支氣管病毒抗體的間接免疫熒光試劑盒

在審

• 申請號: 202011371468.3
• 申請日: 2020-11-30
• 公開（公告）號: CN112630427A
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發明（設計）人: 葉建強;路浩;尹朝憬;武佳妍;謝菁;張建軍;邵紅霞;秦愛建
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;C12N15/50;C12N15/85;C12N5/10;C07K14/165
• 代理公司: 揚州蘇中專利事務所(普通合伙) 32222
• 代理人: 沈志海

1.一種基于S1蛋白的檢測流行QX型雞傳染性支氣管病毒抗體的間接免疫熒光試劑盒，其特征在于，包括表達S1蛋白的LMH細胞、FITC標記的羊抗雞抗體、樣品稀釋液、洗滌液；

所述表達S1蛋白的LMH細胞，是轉染S1蛋白真核表達質粒的表達QX型雞傳染性支氣管病毒S1蛋白的LMH細胞；所述表達S1蛋白的LMH細胞，通過下述步驟得到：

（1）、QX型雞傳染性支氣管病毒S1蛋白真核表達質粒構建：以pcDNA3.1真核表達載體以及QX型雞傳染性支氣管病毒的RNA反轉錄的cDNA為模板，以SEQIDNO.1、SEQIDNO.2的序列為引物PCR擴增出線性化pcDNA3.1載體，以SEQIDNO.3、SEQIDNO.4的序列為引物PCR擴增出QX型雞傳染性支氣管病毒S1蛋白基因SEQIDNo.5；隨后利用重組酶Exnase TMII將線性化的pcDNA3.1載體以及QX型雞傳染性支氣管病毒S1蛋白基因的PCR產物進行快速體外重組克隆，重組克隆經序列驗證后，命名為pcDNA3.1-IBV-S1；并用IFA驗證S1蛋白在LMH細胞中的表達；

其中：

SEQ ID NO.1為：

上游引物：GAATTCTGCAGATATCCAGCACAGTG；

SEQ ID NO.2為：

下游引物：GCTCGGTACCAAGCTTAAGTTTAAACG；

SEQ ID NO.3為：

上游引物：AGCTTGGTACCGAATGTTGGGGAAGTCACTGT；

SEQ ID NO.4為：

下游引物：ATATCTGCAGAATTTAACGATGTGAGCTATTGG；

SEQ ID NO.5為：

ATGTTGGGGAAGTCACTGTTTTTAGTGACCATTTTGTGTGCACTATGTAGTGCAAATTTGTTTGATTTTGCCAATAATTATGTGTACTACTACCAAAGTGCCTTTAGGCCTCCTACTGGATGGCATCTGCAAGGGGGTGCTTATGCAGTAGTGAATTCTACTAATTACACTAGTAATGCTGGTTCTGCAAGTGGGTGCACTGTTGGTGTTATTAAGGACGTTTATAATCAAAGTGCGGCTTCTATAGCTATGACAGCACCTCCTCAGGGTATGGCTTGGTCTAAGTCACAATTTTGTAGTGCACACTGTAACTTTTCTGAAATTACAGTTTTTGTCACACATTGTTATAGTAGTGGTACAGGGTCTTGTCCTCTAACAGGCCTGATTGCACGTGATCATATTCGTATTTCAGCAATGAAAAATGGTTCTTTATTTTATAATTTAACAGTTAGCGTATCTAAATACCCTAGATTTAAGTCTTTTCAATGTGTTAACAACTTCACATCTGTTTATTTAAATGGTGATCTTGTTTTTACTTCTAATAAAACTACTGATGTTACGTCAGCAGGTGTGTATTTTAAAGCAGGTGGACCTGTAAACTATAGTGTTATGAAAGAATTTAAGGTTCTTGCTTACTTTGTTAATGGTACAGCACCAGATGTAATTTTGTGTGACAATTCCCCTAAGGGTTTGCTAGCCTGTCAATATAATACTGGCAATTTTTCAGACGGCTTTTATCCTTTTACTAATAGTACTTTAGTTAGGGACAAGTTCATTGTCTATCGTGAAAGTAGTGTTAATACTACTTTGACGTTAACTAATTTCACTTTTACTAATGTAAGTACTGCACAGCCTAATAGTGGTGGTGTTAGTACTTTTCATCTATATCAAACACAAACAGCTCAGAGTGGTTATTATAATTTTAATTTGTCATTTCTGAGTCAGTTTGTGTATAAGGCAAGTGATTTTATGTATGGGTCTTATCATCCTAGGTGTTCTTTTAAACCAGAAACCATTAATAGTGGTTTATGGTTTAATTCTTTGTCAGTTTCTCTTACTTATGGACCCCTACAGGGAGGGTGTAAGCAATCTGTTTTTAGTGGTAAGGCAACGTGTTGTTATGCCTACTCTTATAATGGCCCTAGGGCATGTAAAGGTGTTTATTCAGGTGAATTAAGCAAGACTTTTGAATGTGGATTGCTGGTTTATGTTACTAAGAGTGATGGCTCTCGTATACAGACTAGAACAGAGCCCTTAGTATTAACGCAACACAATTATAATAATATTACTTTAGATAAGTGTGTTGACTATAATATATATGGCAGAGTAGGCCAAGGTTTTATTACTAATGTGACTGATTCTGCTGCTAATTCTAGTTATTTAGCAGATGGTGGGTTAGCTATTTTAGATACTTCGGGTGCCATAGATGTCTTTGTTGTACAGGGCAGCTATGGTCTTAATTATTACAAGGTCAATCCTTGTGAAGATGTTAATCAACAGTTTGTAGTGTCTGGTGGTAATATAGTTGGCATTCTTACTTCTAGAAATGAAACAGGTTCTGAACAGGTTGAGAACCAGTTTTATGTTAAGTTAACCAATAGCTCACATCGTTAA；

（2）、制備檢測QX型雞傳染性支氣管病毒抗體的抗原：將pcDNA3.1-IBV-S1重組質粒，用TransIT-LT1轉染試劑轉染LMH細胞；細胞轉染48小時后，用丙酮乙醇固定液固定細胞5分鐘；固定的表達細胞QX型雞傳染性支氣管病毒S1蛋白的LMH細胞自然干燥后置-20度待用，即為檢測QX型雞傳染性支氣管病毒抗體的抗原。