[發明專利]一種從細胞培養液中分離純化抗體的方法

在審

• 申請號: 202011370661.5
• 申請日: 2020-11-30
• 公開（公告）號: CN112457395A
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發明（設計）人: 李智;諸葛鑫;劉金濤
• 申請（專利權）人: 李智
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;C07K1/14;C07K1/34
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 王熙文

本發明公開了一種從細胞培養液中分離純化抗體的方法，包括：制備弱酸性緩沖液，向其中加入Protein A?聚甲基丙烯酸甲酯微球復合物，得到弱酸性混合液；取細胞培養液的上清液，加入所述弱酸性混合液中，勻速攪拌第一時間，使所述抗體吸附于混合液中的所述復合物表面，形成包括抗體?Protein A?PMMA微球復合物的混合液；過濾所述抗體?Protein A?PMMA微球復合物的混合液，去除濾液；將所述抗體?Protein A?PMMA微球復合物加入弱堿性緩沖液中，勻速攪拌第二時間；使用微孔濾膜進行過濾。相比于現有技術而言，本發明步驟簡單、耗時短，利于大規模產業推廣。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別是涉及一種從細胞培養液中分離純化抗體的方法。

背景技術

制備高特異性、高效價的抗體是實驗免疫學技術的基礎，抗體質量的高低將直接影響試驗的成敗。通過不同方法制備的抗體往往與多種雜蛋白混雜在一起，為了獲得成分相對單一的抗體或將抗體用于特定的用途，就需要進行抗體純化。上述不同方法中，細胞培養是其中的一種。通過細胞培養得到的抗體通常含有復雜的其他成分的雜質，在使用前必須經過純化。

Protein A(蛋白A)廣泛被應用于從培養上清液選擇性分離出所需抗體。通常，Protein A用于離子交換層析、親和層析從而得到所需要的抗體，移除殘留的微量雜質，如宿主細胞蛋白、宿主細胞DNA及親和層析柱的析出物。就一般工藝而言，親和層析及離子交換層析都需要不同的操作條件。例如，耗時、耗力的層析洗脫過程以及復雜的緩沖液置換過程。

發明內容

鑒于此，本發明提供了一種從細胞培養液中分離純化抗體的方法，包括：

制備弱酸性緩沖液，向所述弱酸性緩沖液中加入Protein A-聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)微球復合物，得到弱酸性混合液；

取所述細胞培養液的上清液，將其加入所述弱酸性混合液中，勻速攪拌，持續第一時間，使所述抗體吸附于混合液中的所述復合物表面，形成包括抗體-Protein A-PMMA微球復合物的混合液；

過濾所述抗體-Protein A-PMMA微球復合物的混合液，去除濾液；

將所述抗體-Protein A-PMMA微球復合物加入弱堿性緩沖液中，勻速攪拌，持續第二時間；

使用微孔濾膜進行過濾，保留濾液，即得分離純化后的所述抗體。

可選地，所述弱酸性緩沖液為醋酸鹽緩沖液。

可選地，所述弱酸性緩沖液的pH值為3.5-3.8。

可選地，所述PMMA微球的直徑為20-50μm。

可選地，所述上清液與所述弱酸性混合液的體積比為1：500-1：1000。

可選地，所述第一時間為1-1.5h。

可選地，所述弱堿性緩沖液為磷酸鹽緩沖液。

可選地，所述弱堿性緩沖液pH值為7.3-7.5。

可選地，所述第二時間為1-2h。

可選地，所述微孔濾膜直徑為5-10μm。

相比于現有技術，本發明不需要利用Protein A進行層析，而是將其連接于PMMA微球上，在均相溶液中進行目標抗體的捕獲以及分離。并且，通過改變均相溶液的pH值即可改變目標抗體與Protein A的親和力從而實現在均相溶液條件下對目標抗體的分離以及富集。相比于現有技術而言，本發明步驟簡單、耗時短，利于大規模產業推廣。

具體實施方式

為了更好的理解本發明，下面通過實施例對本發明進一步說明，實施例只用于解釋本發明，不會對本發明構成任何的限定。