[發明專利]一種從細胞培養液中分離純化抗體的方法在審
| 申請號: | 202011370661.5 | 申請日: | 2020-11-30 |
| 公開(公告)號: | CN112457395A | 公開(公告)日: | 2021-03-09 |
| 發明(設計)人: | 李智;諸葛鑫;劉金濤 | 申請(專利權)人: | 李智 |
| 主分類號: | C07K16/00 | 分類號: | C07K16/00;C07K1/14;C07K1/34 |
| 代理公司: | 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246 | 代理人: | 王熙文 |
| 地址: | 215000 江蘇省蘇州*** | 國省代碼: | 江蘇;32 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 細胞 培養液 分離 純化 抗體 方法 | ||
1.一種從細胞培養液中分離純化抗體的方法,其特征在于,包括:
制備弱酸性緩沖液,向所述弱酸性緩沖液中加入Protein A-聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)微球復合物,得到弱酸性混合液;
取所述細胞培養液的上清液,將其加入所述弱酸性混合液中,勻速攪拌,持續第一時間,使所述抗體吸附于混合液中的所述復合物表面,形成包括抗體-Protein A-PMMA微球復合物的混合液;
過濾所述抗體-Protein A-PMMA微球復合物的混合液,去除濾液;
將所述抗體-Protein A-PMMA微球復合物加入弱堿性緩沖液中,勻速攪拌,持續第二時間;
使用微孔濾膜進行過濾,保留濾液,即得分離純化后的所述抗體。
2.根據權利要求1所述的從細胞培養液中分離純化抗體的方法,其特征在于:
所述弱酸性緩沖液為醋酸鹽緩沖液。
3.根據權利要求1或2所述的從細胞培養液中分離純化抗體的方法,其特征在于:
所述弱酸性緩沖液的pH值為3.5-3.8。
4.根據權利要求1所述的從細胞培養液中分離純化抗體的方法,其特征在于:
所述PMMA微球的直徑為20-50μm。
5.根據權利要求1所述的從細胞培養液中分離純化抗體的方法,其特征在于:
所述上清液與所述弱酸性混合液的體積比為1:500-1:1000。
6.根據權利要求1所述的從細胞培養液中分離純化抗體的方法,其特征在于:
所述第一時間為1-1.5h。
7.根據權利要求1所述的從細胞培養液中分離純化抗體的方法,其特征在于:
所述弱堿性緩沖液為磷酸鹽緩沖液。
8.根據權利要求1或7所述的從細胞培養液中分離純化抗體的方法,其特征在于:
所述弱堿性緩沖液pH值為7.3-7.5。
9.根據權利要求1所述的從細胞培養液中分離純化抗體的方法,其特征在于:
所述第二時間為1-2h。
10.根據權利要求1所述的從細胞培養液中分離純化抗體的方法,其特征在于:
所述微孔濾膜直徑為5-10μm。
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