[發(fā)明專利]LAMP等溫?cái)U(kuò)增試劑的凍干微球及其制備方法以及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011369841.1
• 申請日: 2020-11-30
• 公開（公告）號: CN112481359B
• 公開（公告）日: 2021-09-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王云龍;王群智;邵俊影;王欣;林圣博;李強(qiáng);王麗;王雯麗;王昱堃
• 申請（專利權(quán)）人: 河南智泰生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6844
• 分類號: C12Q1/6844
• 代理公司: 鄭州先風(fēng)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 41127
• 代理人: 張鵬輝

1.LAMP等溫?cái)U(kuò)增試劑的凍干微球，其特征在于，包括LAMP引物組、凍干保護(hù)劑以及反應(yīng)液；所述LAMP引物組包括外引物F3、外引物B3、內(nèi)引物FIP、內(nèi)引物BIP、環(huán)引物L(fēng)F、環(huán)引物L(fēng)B；所述凍干保護(hù)劑包括牛血清蛋白、蘇氨酸和PEG20000；LAMP引物組、凍干保護(hù)劑、反應(yīng)液的添加的體積份數(shù)分別為：7～14份、9～17份、9.2～17.75份；反應(yīng)液包括BstDNA聚合酶、指示劑、dNTPS、緩沖劑、MgSO₄、甜菜堿、逆轉(zhuǎn)錄酶，BstDNA聚合酶、指示劑、dNTPS、緩沖劑、MgSO₄、甜菜堿、逆轉(zhuǎn)錄酶的添加的體積份數(shù)分別為：0.8～1.5份、0.5～2份、2.5～3.75份、2～4份、1.0～1.5份、2～4份、0.1～0.5份；所述凍干保護(hù)劑中牛血清蛋白、蘇氨酸和PEG20000添加的體積份數(shù)分別為：3～5份、3～5份、3～7份；所述牛血清蛋白的原始濃度為16.7%（w/v）、蘇氨酸的原始濃度為8%（w/v）、PEG20000的原始濃度為25%（w/v）。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的LAMP等溫?cái)U(kuò)增試劑的凍干微球，其特征在于，所述反應(yīng)液還包括dUTP和UNG酶，dUTP和UNG酶添加的體積份數(shù)分別為：1～2份、0.1～0.5份。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的LAMP等溫?cái)U(kuò)增試劑的凍干微球，其特征在于，所述指示劑為SYBR Green I；所述緩沖劑為PCR buffer。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的LAMP等溫?cái)U(kuò)增試劑的凍干微球，其特征在于，所述LAMP引物組中F3、B3、LF、LB、 FIP、BIP的添加的體積份數(shù)分別為0.5～1.0份、0.5～1.0份、1～2份、1～2份、2～4份、2～4份。

5.如權(quán)利要求1所述的LAMP等溫?cái)U(kuò)增試劑的凍干微球的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）制備凍干保護(hù)劑：取配方量的牛血清蛋白、蘇氨酸、PEG20000；

2）配制擴(kuò)增反應(yīng)體系：取配方量的LAMP引物組和反應(yīng)液，混合得到擴(kuò)增反應(yīng)體系；

3）凍干成微球：將凍干保護(hù)劑與擴(kuò)增反應(yīng)體系混合均勻，逐滴的滴入液氮中速凍成球，之后冷凍干燥，即得。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的LAMP等溫?cái)U(kuò)增試劑的凍干微球的制備方法，其特征在于，所述冷凍干燥的程序?yàn)椋?50～-60℃下進(jìn)行第一次干燥8～16h，之后在20～30℃下進(jìn)行二次升華干燥3～4h，即得。

7.如權(quán)利要求1所述的LAMP等溫?cái)U(kuò)增試劑的凍干微球在LAMP等溫?cái)U(kuò)增中的應(yīng)用。