[發明專利]一種豬丹毒SpaA抗原蛋白及其優化克隆的制備方法在審
| 申請號： | 202011366261.7 | 申請日： | 2020-11-29 |
| 公開（公告）號： | CN113388624A | 公開（公告）日： | 2021-09-14 |
| 發明（設計）人： | 陳貴錢;陳劍清;藍勝芝;呂正兵 | 申請（專利權）人： | 浙江理工大學 |
| 主分類號： | C12N15/31 | 分類號： | C12N15/31;C07K14/195;C12N15/70;A61K39/02;A61P31/04;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海諾衣知識產權代理事務所(普通合伙) 31298 | 代理人： | 衣然 |
| 地址： | 310018 浙江省杭州市*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 種豬 丹毒 spaa 抗原 蛋白 及其 優化 克隆 制備 方法 | ||
1.一種豬丹毒SpaA抗原蛋白，其特征在于，其編碼基因序列與SEQ ID NO.1具有大于90%的同一性，或大于92%的同一性，或大于95%的同一性，或大于96%的同一性，或大于97%的同一性，或大于98%的同一性，或大于99%的同一性；優選如SEQ ID NO.1所示。
2.一種豬丹毒SpaA抗原蛋白，其特征在于，其氨基酸序列與SEQ ID NO.2具有大于90%的同一性，或大于92%的同一性，或大于95%的同一性，或大于96%的同一性，或大于97%的同一性，或大于98%的同一性，或大于99%的同一性；優選如SEQ ID NO.2所示。
3.一種重組載體，其特征在于，含有權利要求1或2所述的豬丹毒SpaA抗原蛋白的編碼基因；優選是pET-16b-ErSpaA。
4.一種豬丹毒SpaA基因工程疫苗，其特征在于，所述疫苗包含權利要求1或2所述的豬丹毒SpaA抗原蛋白；或包含含有權利要求3所述的重組載體。
5.根據權利要求4所述的豬丹毒SpaA基因工程疫苗，其特征在于，還包含疫苗佐劑、助懸劑、表面活性劑、抗原滅活劑和/或防腐劑。
6.如權利要求1或2所述的豬丹毒SpaA抗原蛋白優化克隆的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
構建含有上述重組蛋白基因的表達載體；
重組蛋白的表達。
7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，還包括對表達系統表達重組蛋白的純化的步驟；
任選地，還包括在構建表達載體前對目的基因的獲取步驟。
8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法的具體步驟為：
將獲取的目的基因酶切后連接入pET-16b載體，轉入克隆菌，獲得重組載體pET-16b-ErSpaA；
上述重組載體分別轉入表達菌中，誘導表達目的蛋白。
9.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述克隆菌優選甘油菌，表達菌優選Rossetta gami B或BL21 star。
10.如權利要求1或2所述的豬丹毒SpaA抗原蛋白、權利要求3所述的重組載體、權利要求4所述的基因工程疫苗在制備抗豬丹毒桿菌感染的疫苗中的應用。
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