[發明專利]一種穩定檢測抗CD22單抗生物學活性的方法

在審

• 申請號: 202011365050.1
• 申請日: 2020-11-27
• 公開（公告）號: CN112626162A
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發明（設計）人: 王蘭;郭莎;于傳飛;張峰;王文波;段茂芹;郭瀟;劉春雨
• 申請（專利權）人: 中國食品藥品檢定研究院
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;G01N33/68
• 代理公司: 北京預立生科知識產權代理有限公司 11736
• 代理人: 孟祥斌;李紅偉

本發明公開了一種穩定檢測抗CD22單抗生物學活性的方法。所述方法包括將protein A加入到96孔微孔板，靜置包被，繼而將抗CD22抗體梯度稀釋后加入到該96孔微孔板，靜置包被，然后向B細胞懸液中加入抗IgM抗體，并加入到上述96孔微孔板進行孵育，最后向該96孔微孔板內加入檢測試劑，用酶標儀檢測活細胞水平。本方法能穩定、高效地檢測抗CD22單抗的生物學活性，為抗CD22單抗活性的質量控制提供了有效的技術手段。

技術領域

本發明屬于生物藥物活性檢測領域，涉及一種穩定檢測抗CD22單抗生物學活性的方法。

背景技術

B細胞的異常活化和過度增殖是自身免疫病和B細胞腫瘤形成的重要機制，其結果為促使自身抗體形成、作為抗原提成細胞促進免疫反應的發生、分泌炎性細胞因子、免疫調節失調等，因此，靶向B細胞是治療自身免疫病和B細胞腫瘤的方式和思路之一。

CD22，又名Siglec-2，是一種I型跨膜糖蛋白，表達于IgM⁺B細胞表面。胞外區含有7個免疫球蛋白樣結構域，胞內區含有6個保守的酪氨酸，這些酪氨酸既可組合成ITIM基序，又可組合為內吞基序。盡管CD22交聯可以誘發B細胞死亡，但CD22與BCR復合體相互作用，協助引發下游信號轉導和促進細胞死亡的作用更加明顯，如用特定抗原或抗體交聯Burkitt淋巴瘤B細胞表面的IgM后，抗CD22抗體可以協助誘導Burkitt淋巴瘤B細胞的凋亡。基于這一原理，抗CD22抗體可以用于自身免疫性疾病及B細胞腫瘤的治療。已有文獻表明，抗CD22單抗可以明顯改善類風濕關節炎患者關節滑膜的炎性浸潤，明顯降低外周血B細胞數量，并使B細胞上的標志分子如CD19、CD20、CD21等的密度下降，此外，抗CD22單抗還能抑制系統性紅斑狼瘡患者活化的B細胞分泌炎性因子如IL-6、TNFα等。

單抗的活性測定是對藥物的有效成分和含量以及藥物效價的測定，是確保抗體類藥物有效性的重要質控指標。目前靶向CD22的單抗藥物主要分為兩大類，一類是抗CD22單抗，另一類為抗CD22的抗體偶聯藥物(利用CD22的內吞特點)。目前國內尚無已上市的抗CD22的單抗，處于臨床開發階段的抗CD22單抗有深圳賽樂敏公司的人鼠嵌合抗CD22單抗以及UCB/Immunomedics公司的人源化抗CD22單抗，前者的適應癥為類風濕性關節炎和系統性紅斑狼瘡，后者的適應癥為非霍奇金淋巴瘤、系統性紅斑狼瘡和干燥綜合征。抗CD22單抗活性檢測的難點是確保抗CD22單抗與CD22結合后不被細胞內吞，目前的檢測方法采用非特異性結合方式將抗CD22抗體固定在96孔微孔板中，由于非特異性結合方式可能對抗CD22單抗的抗原結合區域有不確定的影響，因此該方法結果不夠穩定。

針對上述不足，本發明利用proteinA與抗體Fc段特異性結合的特點，將抗CD22單抗同向、均一地固定在proteinA預包被的96孔板中，使Fab段游離以便很好地發揮后續作用。經過對試驗參數的優化，該方法能穩定、高效地檢測抗CD22單抗的生物學活性，為抗CD22單抗活性的質量控制提供了有效的技術手段。

發明內容

為了彌補現有技術的不足，本發明的目的在于建立一種穩定、高效檢測抗CD22單抗生物學活性的方法，所述方法包括：

(1)將proteinA加入到96孔微孔板，靜置包被；

2)將抗CD22抗體梯度稀釋后加入到步驟1)中的96孔微孔板，靜置包被；

3)向B細胞懸液中加入抗IgM抗體，然后加入到步驟2)中的96孔微孔板進行孵育；

4)向步驟3)中96孔微孔板內加入檢測試劑，用酶標儀檢測活細胞水平。

進一步，步驟1)中proteinA的預包被濃度為0.1-10μg/ml。

進一步，濃度為1μg/ml。

進一步，步驟1)中靜置方式為室溫靜置或2-8℃靜置。

進一步，靜置方式為室溫靜置。