[發(fā)明專利]LC-MS/MS內(nèi)標(biāo)法測(cè)定肉制品中豬肉含量的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011363398.7
• 申請(qǐng)日: 2020-11-27
• 公開（公告）號(hào): CN112630319A
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李瑩瑩;張穎穎;王守偉;張明悅;康超娣;郭文萍;趙文濤;李慧晨
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京食品科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/08;G01N30/14
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 盛大文

1.一種LC-MS/MS內(nèi)標(biāo)法測(cè)定肉制品中豬肉含量的方法，其特征在于，包括以下步驟：對(duì)含豬肉的待測(cè)肉制品進(jìn)行預(yù)處理，得到待測(cè)肉制品的多肽樣品溶液；采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜對(duì)所述多肽樣品溶液進(jìn)行檢測(cè)，以豬肉的特征多肽作為檢測(cè)的分析對(duì)象，以同位素標(biāo)記的所述特征多肽為內(nèi)標(biāo)物，采用內(nèi)標(biāo)法對(duì)待測(cè)肉制品中豬肉的含量進(jìn)行定量檢測(cè)；

其中，所述特征多肽選自Pep_1至Pep_3中的一種或兩種以上：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的LC-MS/MS內(nèi)標(biāo)法測(cè)定肉制品中豬肉含量的方法，其特征在于，所述同位素標(biāo)記的特征多肽的信息如ISTD_1至ISTD_3所示，其中，所述ISTD_1為同位素標(biāo)記Pep_1后的多肽，所述ISTD_2為同位素標(biāo)記Pep_2后的多肽，所述ISTD_3為同位素標(biāo)記Pep_3后的多肽：

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的LC-MS/MS內(nèi)標(biāo)法測(cè)定肉制品中豬肉含量的方法，其特征在于，所述特征多肽為Pep_2。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的LC-MS/MS內(nèi)標(biāo)法測(cè)定肉制品中豬肉含量的方法，其特征在于，所述內(nèi)標(biāo)法的步驟包括：

配制含不同濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)豬肉多肽樣品與相同濃度內(nèi)標(biāo)物的混合標(biāo)準(zhǔn)品工作溶液，以標(biāo)準(zhǔn)豬肉多肽樣品對(duì)應(yīng)的豬肉質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以特征多肽與內(nèi)標(biāo)物的色譜峰面積比為縱坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線；

對(duì)加入有相同濃度內(nèi)標(biāo)物的待測(cè)肉制品的多肽樣品溶液進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)所述標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測(cè)肉制品中豬肉的含量。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的LC-MS/MS內(nèi)標(biāo)法測(cè)定肉制品中豬肉含量的方法，其特征在于，所述預(yù)處理包括以下步驟：

(1)提取樣品高豐度蛋白：向待測(cè)肉制品中加入提取液，在液氮條件下進(jìn)行冷凍研磨，然后離心取上清液；

(2)向步驟(1)取得的上清液中加入NH₄HCO₃和胰蛋白酶進(jìn)行酶解，加入三氟乙酸終止反應(yīng)，經(jīng)過(guò)HLB固相萃取柱凈化，供上機(jī)檢測(cè)。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的LC-MS/MS內(nèi)標(biāo)法測(cè)定肉制品中豬肉含量的方法，其特征在于，所述提取液為0.04～0.06mol/L Tris-HCl、6～8mol/L尿素、1～3mol/L硫脲。