[發明專利]LC-MS/MS內標法測定肉制品中豬肉含量的方法

在審

• 申請號: 202011363398.7
• 申請日: 2020-11-27
• 公開（公告）號: CN112630319A
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發明（設計）人: 李瑩瑩;張穎穎;王守偉;張明悅;康超娣;郭文萍;趙文濤;李慧晨
• 申請（專利權）人: 北京食品科學研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/08;G01N30/14
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 盛大文

本發明屬于食品檢測技術領域，具體涉及一種LC?MS/MS內標法測定肉制品中豬肉含量的方法，以特定的豬肉特征多肽作為檢測的分析對象，以同位素標記的所述特征多肽為內標物，采用內標標準曲線法定量。本發明基于高效液相色譜?串聯質譜技術，結合篩選出可用于準確定量分析的豬肉多肽，制備相應的同位素內標多肽，建立了測定肉制品中豬肉含量的內標定量方法。該方法通過繪制內標法豬肉標準曲線，可準確計算其中所含有的豬肉含量，是一種靈敏、穩定、特異、高通量、操作性強、定量準確的分析方法。

技術領域

本發明屬于食品檢測技術領域，具體涉及一種LC-MS/MS內標法測定肉制品中豬肉含量的方法。

背景技術

肉制品是我國居民飲食結構中的重要組成部分，深受消費者的喜愛。由于我國居民消費以豬肉為主，當前國內豬肉制品所占的市場份額最大，占比超60％。近幾年，受非洲豬瘟疫情的影響，生豬跨省調運，生豬交易市場被關閉，豬肉價格顯著增長，進而導致豬肉制品生產企業成本明顯增高。

一些不法商家為了降低成本，使用大量植物蛋白替代畜禽肉成分，或者用雞、鴨肉(低價肉)替代或部分替代豬肉，但在配料表中卻不按事實標注，雖然蛋白總量符合要求，但動物蛋白較低，使得產品價格低于市場價格，致合規性肉類制品企業的產品在市場上受阻，競爭力不足，長此以往影響企業的生存及發展。因此建立肉制品中豬肉含量的測定方法既順應市場需求，也可為規范行業標識、維護市場公平提供強有力的技術支持。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的不足，提供一種LC-MS/MS內標法測定肉制品中豬肉含量的方法。本發明選擇定量較好的豬肉多肽作為分析對象，通過前處理方法提取待測肉制品中豬肉特異性多肽，并加入合成的同位素內標多肽，用于校正儀器狀態、基質效應以及實驗前處理過程中的損失，然后進行LC-MS/MS分析，并建立豬肉對應多肽及內標的標準曲線，以豬肉含量作為橫坐標，定量多肽與對應內標多肽的峰面積比值作為縱坐標，通過內標法計算得到待測肉制品中豬肉含量。

具體來說，本發明提供了如下技術方案：

一種LC-MS/MS內標法測定肉制品中豬肉含量的方法，包括以下步驟：對含豬肉的待測肉制品進行預處理，得到待測肉制品的多肽樣品溶液；采用液相色譜串聯質譜對所述多肽樣品溶液進行檢測，以豬肉的特征多肽作為檢測的分析對象，以同位素標記的所述特征多肽為內標物，采用內標法對待測肉制品中豬肉的含量進行定量檢測；

其中，所述特征多肽選自Pep_1至Pep_3中的一種或兩種以上：

Pep_1的序列如下:EPITVSSDQMAK(SEQ ID No.1)；Pep_1的序列如下:GGPLTAAYR(SEQ ID No.2)；Pep_1的序列如下:HDPSLLPWTASYDPGSAK(SEQ ID No.3)

本發明的發明人利用高分辨質譜對純豬肉及豬肉制品進行數據采集，并使用蛋白質組學數據庫和軟件進行數據分析，篩選出豬肉的專屬性多肽鏈；將得到的多肽鏈信息轉化為離子對信息導入至LC-MS/MS，通過優化儀器條件，對樣品信息進行數據采集及處理，篩選響應值高、穩定性好、定量準確的多肽鏈及離子信息；制備同位素內標多肽，通過標準曲線數據擬合及樣品分析，進一步篩選出如上表所示的使用內標法定量的多肽信息。圖1為豬肉的總離子流圖和3種特征多肽的提取離子流圖。

優選的，上述LC-MS/MS內標法測定肉制品中豬肉含量的方法中，所述同位素標記的特征多肽的信息如如ISTD_1至ISTD_3所示，其中，所述ISTD_1為同位素標記Pep_1后的多肽，所述ISTD_2為同位素標記Pep_2后的多肽，所述ISTD_3為同位素標記Pep_3后的多肽：

優選的，上述LC-MS/MS內標法測定肉制品中豬肉含量的方法中，所述特征多肽為Pep_2。