[發明專利]一種樹脂及其制備方法以及其在制備頭尾環肽中的應用

有效

• 申請號: 202011359990.X
• 申請日: 2020-11-27
• 公開（公告）號: CN112592382B
• 公開（公告）日: 2022-10-04
• 發明（設計）人: 方葛敏;席痛快;武夢;朱漢英;張燕妮
• 申請（專利權）人: 安徽大學
• 主分類號: C07K1/06
• 分類號: C07K1/06;C07K1/04;C07K1/20
• 代理公司: 安徽省合肥新安專利代理有限責任公司 34101
• 代理人: 喬恒婷

本發明公開了一種樹脂及其制備方法以及其在制備頭尾環肽中的應用，其中樹脂的結構通式如下所示：本發明通過三次順序化學修飾(即二硫醇試劑修飾、二(溴甲基)苯修飾和巰基乙胺修飾)2?氯三苯甲基氯樹脂獲得該種新樹脂。通過Fmoc固相合成和液相N端溴乙酰基與C端硫醇的反應，該樹脂可直接用于制備不同鏈長的和結構的硫醚鍵鍵合的頭尾環肽。

技術領域

本發明涉及一種樹脂及其制備方法以及其在制備頭尾環肽中的應用。本發明提供的樹脂可用于快速制備含有不同鏈長和結構的硫醚鍵鍵合的頭尾環肽，有利于頭尾硫醚鍵鍵合環肽的硫醚連接臂結構優化。

背景技術

頭尾相連的大環肽具有結構剛性，能夠抵抗多種蛋白酶的水解，并具有更高的靶標選擇性和細胞膜通透性，是現代多肽藥物發現中一個極具吸引力的框架結構。在多肽藥物的結構改造和功能改進方面，多肽的頭尾環化修飾是一種極為常見的結構優化方式。目前，人們發展了多種合成頭尾環肽的方法，包括天然化學連接、基于Ser的肽連接、C-C偶聯、巰基雙烷基化等。由于操作簡單和合成成本低，巰基雙烷基化策略被人們廣泛應用于構建硫醚鍵鍵合的環肽，并已經成為組合文庫和噬菌體文庫中構建環肽的主流策略。

最近研究表明，硫醚鍵交聯臂鍵長和鍵角的微小變化能夠引起環肽的生物活性的顯著變化。為了得到更高活性的、酶學穩定性更強的硫醚鍵鍵合的頭尾相連大環肽，人們需要通過改變頭尾環化連接臂的化學結構和連接臂的長短來進一步優化環肽的結構與功能。但是，對環肽連接臂化學結構和連接臂長短的優化涉及繁復的多步修飾操作，耗時和效率低。不同鏈長硫醚鍵鍵合的頭尾環肽合成，前人方法涉及樹脂上保護多肽的N端的巰基修飾和溶液中未保護肽頭尾的巰基雙烷基化。多肽的固相化學修飾和液相再環化過程往往存在操作繁瑣和周期長的缺點。為了突破前人方法的困難，本發明中提供了一種新型樹脂用于該類型環肽的快速直接合成，將有利于快速優化環肽連接臂的化學結構和連接臂的長短。

發明內容

本發明針對上述現有技術所存在的問題，提供了一種樹脂及其制備方法以及其在制備頭尾環肽中的應用。本發明提供的樹脂結構可以輕松改變頭尾環化連接臂的化學結構和連接臂的長短進而進一步優化環肽的結構與功能。

本發明樹脂，其結構通式如下所示：

本發明樹脂是通過對2-氯三苯甲基氯樹脂依次進行二硫醇試劑修飾、二(溴甲基)苯修飾和巰基乙胺修飾后獲得的，具體包括如下步驟：

步驟1：二硫醇試劑修飾2-氯三苯甲基氯樹脂

80μmol的2-氯三苯甲基氯樹脂在含有30％TFA的DCM中處理一段時間后，再與溶解在DCM的二硫醇試劑反應(800μmol，10倍當量)多次，直至樹脂顏色由深紅色變為淺黃色。

步驟2：樹脂上未反應基團的封閉

在DCM洗滌樹脂4次后，加入混合溶劑MeOH/DIEA/DCM，常溫震蕩30分鐘。

步驟3：樹脂上形成二硫鍵的還原

在DCM洗滌樹脂4次后，加入混合溶劑β-ME/DIEA/NMP，常溫震蕩30分鐘。

步驟4：二(溴甲基)苯修飾樹脂

依次用DCM和DMF洗滌樹脂4次，加入現配制的混合溶劑二(溴甲基)苯/DIEA/DMF反應混合液，常溫震蕩1小時。

步驟5：巰基乙胺修飾樹脂

在DMF洗滌樹脂4次后，加入現配制的混合溶劑巰基乙胺/DIEA/DMF，常溫震蕩1小時。

步驟6：樹脂上未反應基團的封閉

在DMF洗滌樹脂4次后，加含20％哌啶的DMF溶液，常溫震蕩30分鐘。