[發(fā)明專利]一種樹脂及其制備方法以及其在制備頭尾環(huán)肽中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011359990.X
• 申請日: 2020-11-27
• 公開（公告）號: CN112592382B
• 公開（公告）日: 2022-10-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 方葛敏;席痛快;武夢;朱漢英;張燕妮
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽大學(xué)
• 主分類號: C07K1/06
• 分類號: C07K1/06;C07K1/04;C07K1/20
• 代理公司: 安徽省合肥新安專利代理有限責(zé)任公司 34101
• 代理人: 喬恒婷

1.一種樹脂，其特征在于其結(jié)構(gòu)通式如下所示：

2.一種權(quán)利要求1所述樹脂的制備方法，其特征在于：

通過對2-氯三苯甲基氯樹脂依次進行二硫醇試劑修飾、二(溴甲基)苯修飾和巰基乙胺修飾后獲得的，包括如下步驟：

步驟1：二硫醇試劑修飾2-氯三苯甲基氯樹脂

80μmol的2-氯三苯甲基氯樹脂在含有30％TFA的DCM中處理一段時間后，再與溶解在DCM的二硫醇試劑反應(yīng)多次，直至樹脂顏色由深紅色變?yōu)闇\黃色；

步驟2：樹脂上未反應(yīng)基團的封閉

在DCM洗滌樹脂4次后，加入混合溶劑MeOH/DIEA/DCM，常溫震蕩30分鐘；

步驟3：樹脂上形成二硫鍵的還原

在DCM洗滌樹脂4次后，加入混合溶劑β-ME/DIEA/NMP，常溫震蕩30分鐘；

步驟4：二(溴甲基)苯修飾樹脂

依次用DCM和DMF洗滌樹脂，加入現(xiàn)配制的混合溶劑二(溴甲基)苯/DIEA/DMF反應(yīng)混合液，常溫震蕩1小時；

步驟5：巰基乙胺修飾樹脂

用DMF洗滌樹脂，然后加入現(xiàn)配制的混合溶劑巰基乙胺/DIEA/DMF，常溫震蕩1小時；

步驟6：樹脂上未反應(yīng)基團的封閉

用DMF洗滌樹脂，加含20％哌啶的DMF溶液，常溫震蕩30分鐘；

步驟7：樹脂上未反應(yīng)基團的再次封閉

用DMF洗滌樹脂，加入混合溶劑MTG/DIEA/NMP，常溫震蕩30分鐘后，用DMF洗滌樹脂4次，得到目標(biāo)產(chǎn)物樹脂。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于：

步驟1中，所述二硫醇試劑包括1，2-乙二硫醇、1，3-丙二硫醇、1，4-丁二硫醇、1，5-戊二硫醇、1，6-己二硫醇、1，8-辛二硫醇、3,6-二氧雜-1,8辛烷二硫醇、1，9-壬二硫醇、1,10-癸二硫醇、1，11-十一二硫醇、1，16-十六二硫醇。

4.一種權(quán)利要求1所述樹脂的應(yīng)用，其特征在于：

將其用于制備含有不同鏈長和結(jié)構(gòu)的硫醚鍵鍵合的頭尾環(huán)肽，以優(yōu)化頭尾硫醚鍵鍵合環(huán)肽的硫醚連接臂結(jié)構(gòu)，包括如下步驟：

(1)對一個特定序列的多肽，利用所述樹脂，通過標(biāo)準(zhǔn)的Fmoc多肽固相合成進行多肽的拼接；

(2)在完成N末端氨基酸的拼接后，用20％哌啶的DMF脫除N末端Fmoc基團，隨后在縮合劑的存在下，采用封閉試劑封閉N末端氨基；

(3)使用三氟乙酸切割液將多肽從樹脂上切割，冰乙醚沉淀，獲得粉末狀態(tài)的多肽；

(4)將步驟(3)得到的多肽粗品溶解在有機溶劑中，常溫震蕩2小時后，利用反相液相色譜進行分析與目標(biāo)肽的純化分離；

所述有機溶劑為DMF和H₂O按體積比2:1的比例復(fù)配構(gòu)成，或者為DMSO。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于：

所述封閉試劑包括氯乙酸、溴乙酸或碘乙酸。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于：

所述有機溶劑的酸度通過加入NH₄HCO₃調(diào)節(jié)到pH＝8～9。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于：

所述頭尾環(huán)肽是通過N端溴乙酰基團、氯乙酰基或碘乙酰基與C末端巰基的烷基化反應(yīng)而制備的，在N末端氨基與C端羧基之間通過如下結(jié)構(gòu)的連接臂實現(xiàn)共價交聯(lián)：