[發明專利]一種檢測重組蛋白電荷變異體的方法及應用

有效

• 申請號: 202011359120.2
• 申請日: 2020-11-27
• 公開（公告）號: CN114563489B
• 公開（公告）日: 2023-09-12
• 發明（設計）人: 劉婭梅;武慧敏;金柳函
• 申請（專利權）人: 盛禾（中國）生物制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/74;G01N30/88;G01N30/96
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1.一種檢測可特異性結合GPC3和CD3蛋白同源二聚體雜質和電荷變異體的含量的方法，其包括如下步驟：

(1)通過高效液相色譜法-離子交換色譜法對待測蛋白進行分析獲得色譜圖，基于所述色譜圖，確定待測可特異性結合GPC3和CD3蛋白同源二聚體雜質和電荷變異體的含量；

(2)所述高效液相色譜法-離子交換色譜法所采用的流動相包括磷酸鹽的混合溶液；通過不同混合比例構成流動相A和流動相B，其中，流動相A選用磷酸氫二鈉溶液，流動相B選用磷酸二氫鈉溶液，所述的磷酸氫二鈉溶液為40mM，所述的磷酸二氫鈉溶液為40mM；

(3)所述高效液相色譜法-離子交換色譜法采用色譜柱，所述色譜柱為離子交換色譜柱WCX；

(4)所述高效液相色譜法-離子交換色譜法的上樣量為10μL，上樣濃度為3mg/mL，流速0.8mL/min，柱溫40℃，檢測波長280nm；

其中該方法所采用的洗脫程序如下：

。

2.根據權利要求1所述檢測可特異性結合GPC3和CD3蛋白同源二聚體雜質和電荷變異體的含量的方法在可特異性結合GPC3和CD3蛋白電荷變異體生產質量控制中的應用。

3.根據權利要求2所述的應用，其中，檢測的可特異性結合GPC3和CD3蛋白電荷變異體中電荷變異體譜圖與可特異性結合GPC3和CD3蛋白電荷變異體的理化對照品譜圖一致時，所得可特異性結合GPC3和CD3蛋白電荷變異體生物制品的活性不受影響或影響處于安全水平，可以生產放行；檢測可特異性結合GPC3和CD3蛋白電荷變異體中電荷變異體譜圖與該可特異性結合GPC3和CD3蛋白電荷變異體的理化對照品譜圖不一致時，所得可特異性結合GPC3和CD3蛋白電荷變異體生物制品的活性受到影響或影響處于不安全水平，則生產該生物制品的工藝過程需要調整和改進，直到生產出的生物制品的電荷變異體處于安全水平，才可放行。

4.根據權利要求1所述檢測可特異性結合GPC3和CD3蛋白同源二聚體雜質和電荷變異體的方法在檢測可特異性結合GPC3和CD3蛋白同源二聚體雜質和電荷變異體中的應用。