[發明專利]一種SARS-CoV-2S蛋白IgG的間接ELISA檢測方法在審
| 申請號： | 202011350893.4 | 申請日： | 2020-11-26 |
| 公開（公告）號： | CN112462059A | 公開（公告）日： | 2021-03-09 |
| 發明（設計）人： | 柳燕;任翠平;周暢;瞿明勝 | 申請（專利權）人： | 安徽醫科大學 |
| 主分類號： | G01N33/569 | 分類號： | G01N33/569;G01N33/543;G01N33/535 |
| 代理公司： | 蘇州翔遠專利代理事務所(普通合伙) 32251 | 代理人： | 王華 |
| 地址： | 230000*** | 國省代碼： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 sars cov 蛋白 igg 間接 elisa 檢測 方法 | ||
1.一種SARS-CoV-2S蛋白IgG的間接ELISA檢測方法，其特征在于：包括下列步驟：
步驟1：將采用ELISA包被液稀釋的新冠病毒刺突蛋白加入酶標板，每孔100μL，4℃過夜，然后用PBST緩沖液清洗酶標板三次，每次靜置1分鐘；
步驟2：向酶標板的每孔加250μL的質量分數為5%的脫脂奶粉溶液進行封閉，4℃過夜，然后用PBST緩沖液清洗酶標板三次，每次靜置1分鐘；
步驟3：將ELISA抗體稀釋液稀釋待檢測血清作為一抗，向步驟2得到的酶標板的每孔加100μL一抗，37℃孵育1h，然后用PBST緩沖液清洗酶標板三次，每次靜置1分鐘；
步驟4：將ELISA抗體稀釋液稀釋的辣根過氧化物標記抗人IgG作為二抗，向步驟3得到的酶標板的每孔加100μL二抗，37℃孵育45min，然后用PBST緩沖液清洗酶標板三次，每次靜置1分鐘；
步驟5：步驟4得到的酶標板的每孔避光加入100μL單組分TMB顯色液，37℃孵育5min，每孔加入50μL終止液，震蕩混勻，采用終點法，檢測波長450nm，參比波長630nm，酶標儀檢測450nm吸光度值OD450nm值；
步驟6：當OD450nm值大于或等于0.3，判定為為陽性，OD450nm值小于0.3則判定為陰性。
2.根據權利要求1所述的SARS-CoV-2S蛋白IgG的間接ELISA檢測方法，其特征在于：步驟1中，采用ELISA包被液稀釋新冠病毒刺突蛋白，得到濃度至濃度為2μg/mL，然后加入酶標板的孔中。
3.根據權利要求1所述的SARS-CoV-2S蛋白IgG的間接ELISA檢測方法，其特征在于：步驟3中，待檢測血清與ELISA抗體稀釋液的體積比為1：100。
4.根據權利要求1所述的SARS-CoV-2S蛋白IgG的間接ELISA檢測方法，其特征在于：步驟4中，辣根過氧化物標記抗人IgG與ELISA抗體稀釋液的體積比為1：50000。
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