[發明專利]一種SARS-CoV-2S蛋白IgG的間接ELISA檢測方法

在審

• 申請號: 202011350893.4
• 申請日: 2020-11-26
• 公開（公告）號: CN112462059A
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發明（設計）人: 柳燕;任翠平;周暢;瞿明勝
• 申請（專利權）人: 安徽醫科大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543;G01N33/535
• 代理公司: 蘇州翔遠專利代理事務所(普通合伙) 32251
• 代理人: 王華

一種SARS?CoV?2S蛋白IgG的間接ELISA檢測方法，包括下列步驟：將采用ELISA包被液稀釋的新冠病毒刺突蛋白加入酶標板，每孔100μL，4℃過夜，PBST緩沖液清洗；加250μL 5%的脫脂奶粉溶液進行封閉，ELISA抗體稀釋液稀釋待檢測血清作為一抗，每孔加100μL一抗，37℃孵育1h；ELISA抗體稀釋液稀釋的辣根過氧化物標記抗人IgG作為二抗，每孔加100μL二抗，37℃孵育45min，每孔避光加入100μL單組分TMB顯色液，37℃孵育5min，每孔加入50μL終止液，檢測波長450nm，參比波長630nm，酶標儀檢測450nm吸光度值OD_450nm值。

技術領域

本發明屬于病毒檢測技術領域，涉及一種SARS-CoV-2S蛋白IgG的間接ELISA檢測方法。

背景技術

在2019年12月發現的與嚴重肺炎相關的冠狀病毒科新成員最初被稱為2019新冠狀病毒(2019-nCoV)，目前被稱為嚴重急性呼吸道綜合征冠狀病毒2型(SARS-CoV-2)，引起冠狀病毒疾病2019(COVID-19)。SARS-CoV-2與另一種人類冠狀病毒(severe acuterespiratory syndrome coronavirus(SARS-CoV))有著高度同源性。SARS-CoV-2通過飛沫傳播，也可能通過糞口途徑傳播。COVID-19病例發病癥狀為干咳、發熱、渾身酸痛無力、腹瀉，病情嚴重的病例的臨床表現為高熱、呼吸困難、血氧水平低，死亡病例多數死于呼吸衰竭以及細胞因子風暴導致的多器官衰竭。冠狀病毒表面的同源三聚體介導病毒進入宿主，這是一種跨膜刺突糖蛋白，是抗體產生的主要靶點，SARS-CoV與SARS-CoV-2Spike蛋白(Sprotein)通過與血管緊張素酶2(ACE2)相互作用進入靶細胞，以SARS-CoV-2S蛋白為抗原制備的多克隆抗體可以有效地抑制SARS-CoV-2假病毒進入靶細胞，但機體產生抗體的變化規律目前還有待于人們進一步認識。

雖然疫情已經得到良好有效的控制，但仍舊有很多問題需要深入的研究。目前，幾種基于聚合酶鏈反應(PCR)的技術檢測病毒RNA是確定新冠病毒感染診斷的主要方法，但是基于呼吸道標本的核酸檢測陽性率低，單一的核酸檢測結果可能會造成新冠病人漏診，需要開發其他方法對核酸檢測進行補充，同時，實時熒光定量PCR(quantitative real-timePCR RT-qPCR)只能檢測標本中是否存在病毒，但并不能反映病例的體液免疫應答情況。

發明內容

本發明的目的在于提供一種SARS-CoV-2S蛋白IgG的間接ELISA檢測方法。

為實現上述目的及其他相關目的，本發明提供的技術方案是：一種SARS-CoV-2S蛋白IgG的間接ELISA檢測方法，其特征在于：包括下列步驟：

步驟1：將采用ELISA包被液稀釋的新冠病毒刺突蛋白加入酶標板，每孔100μL，4℃過夜，然后用PBST緩沖液清洗酶標板三次，每次靜置1分鐘；

步驟2：向酶標板的每孔加250μL的質量分數為5％的脫脂奶粉溶液進行封閉，4℃過夜，然后用PBST緩沖液清洗酶標板三次，每次靜置1分鐘；

步驟3：將ELISA抗體稀釋液稀釋待檢測血清作為一抗，向步驟2得到的酶標板的每孔加100μL一抗，37℃孵育1h，然后用PBST緩沖液清洗酶標板三次，每次靜置1分鐘；

步驟4：將ELISA抗體稀釋液稀釋的辣根過氧化物標記抗人IgG作為二抗，向步驟3得到的酶標板的每孔加100μL二抗，37℃孵育45min，然后用PBST緩沖液清洗酶標板三次，每次靜置1分鐘；

步驟5：步驟4得到的酶標板的每孔避光加入100μL單組分TMB顯色液，37℃孵育5min，每孔加入50μL終止液，震蕩混勻，采用終點法，檢測波長450nm，參比波長630nm，酶標儀檢測450nm吸光度值OD_450nm值；