[發(fā)明專利]一種幾丁質強化木霉防控玉米輪枝鐮刀菌的評價分析方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011350607.4
• 申請日: 2020-11-26
• 公開（公告）號: CN112442524A
• 公開（公告）日: 2021-03-05
• 發(fā)明（設計）人: 宋克超;張建;華懷峰
• 申請（專利權）人: 南京思農生物有機肥研究院有限公司
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18;C12N1/14;A01G7/06;A01G13/00;A01G22/20;C12R1/885;C12R1/77
• 代理公司: 南京鑫之航知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32410
• 代理人: 姚蘭蘭

本發(fā)明屬于植保實驗技術領域，具體涉及一種幾丁質強化木霉防控玉米輪枝鐮刀菌的評價分析方法。其包括無菌條件下輪枝鐮刀菌的樣本接種處理；無菌條件下木霉和輪枝鐮刀菌和自然條件下木霉和鐮刀菌樣本的接種處理；真菌數(shù)量的定量分析；玉米幼苗的土培；真菌孢子的接種處理；土壤酶活測定分析的步驟，為應用幾丁質和木霉防控玉米病菌具有指導意義。

技術領域

本發(fā)明屬于植保實驗技術領域，具體涉及一種幾丁質強化木霉防控玉米輪 枝鐮刀菌的評價分析方法。

背景技術

玉米作為世界范圍內主要的經(jīng)濟作物，在玉米上發(fā)生的病害主要是由鐮刀 菌引起的苗枯病，它能使玉米的根部以及莖部等多處感染，從而造成作物減產 和品質下降。目前，木霉作為土壤習居菌，對改善土壤質地以及促進作物生長 和防治微生物病害具有顯著的效果。為實現(xiàn)農業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，以木霉為首的 生物菌劑的使用已經(jīng)得到行業(yè)專家的青睞，并且利用木霉拮抗防治病害早在國 內外已有報道同時在一些作物立枯病等病害的防治已經(jīng)取得了良好的效果。幾 丁質(Chitin)是一種聚合多糖，是自然界中廣泛存在的生物多聚物，其儲存 量非常豐富。幾丁質作為自然界中廣泛存在的生命第六大元素，能夠抑制病原 菌的生長并且能夠誘導宿主產生幾丁質酶從而分解真菌的細胞壁。早在1962年 就有人研究發(fā)現(xiàn)將幾丁質添加到土壤中能夠促使拮抗菌分解病菌胞壁，1971年 Senh等人發(fā)現(xiàn)幾丁質添加到土壤中對立枯絲核菌(Rhizoctonia solani)具有 抑制作用。木霉在不受外界刺激時細胞中存在少量的幾丁質酶，有研究報道， 當木霉在拮抗病原菌時，能夠產生大量的幾丁質酶等一系列水解酶來水解病原 菌的細胞壁。施加外源誘導物幾丁質，可以激發(fā)木霉產生更多幾丁質酶從而水 解病原菌細胞壁，達到抑制病原菌生長的效果。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是要提供一種操作簡易，分析全面準確，具有很好實用性的 幾丁質強化木霉防控玉米輪枝鐮刀菌的評價分析方法。

為了解決上述技術問題，本發(fā)明采取的技術方案如下：

一種幾丁質強化木霉防控玉米輪枝鐮刀菌的評價分析方法，其包括以下步 驟：

無菌條件下輪枝鐮刀菌的樣本接種處理；

無菌條件下木霉和輪枝鐮刀菌和自然條件下木霉和鐮刀菌樣本的接種處理；

真菌數(shù)量的定量分析；

玉米幼苗的土培；

真菌孢子的接種處理；

土壤酶活測定分析，獲得評價分析結果。

上述的一種幾丁質強化木霉防控玉米輪枝鐮刀菌的評價分析方法，其步驟 (1)所述的無菌條件下輪枝鐮刀菌的樣本接種處理包括以下步驟：將土與蛭石 體積比為1:1均勻混合，121℃，20min滅菌，65℃烘箱過夜干燥，干燥完成 后加入滅菌處理的去離子水，保持水分含量在60％，分成若干個樣本組，其中一 個樣本組加入2％幾丁質，同時加入輪枝鐮刀菌的孢子液混勻使?jié)舛葹?07個/g， 25℃避光培養(yǎng)，培養(yǎng)7d。

上述的一種幾丁質強化木霉防控玉米輪枝鐮刀菌的評價分析方法，其步驟 (2)中的木霉采用哈茨木霉，采用的木霉培養(yǎng)基包括0.2g MgSO4·7H2O，0.9 g K2HPO4，1gNH4NO3，0.15g KCl，3g葡萄糖，10mL 1/300孟加拉紅，20g 瓊脂，蒸餾水補足至1000mL，115℃高壓滅菌30min；待培養(yǎng)基冷卻至50℃， 添加25mL 1％氯霉素，3mL 3％鏈霉素，0.2g五氯硝基苯，1mL曲拉通，1.2 mL霜霉威，150ppm潮霉素。