[發明專利]一種幾丁質強化木霉防控玉米輪枝鐮刀菌的評價分析方法

在審

• 申請號: 202011350607.4
• 申請日: 2020-11-26
• 公開（公告）號: CN112442524A
• 公開（公告）日: 2021-03-05
• 發明（設計）人: 宋克超;張建;華懷峰
• 申請（專利權）人: 南京思農生物有機肥研究院有限公司
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18;C12N1/14;A01G7/06;A01G13/00;A01G22/20;C12R1/885;C12R1/77
• 代理公司: 南京鑫之航知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32410
• 代理人: 姚蘭蘭

1.一種幾丁質強化木霉防控玉米輪枝鐮刀菌的評價分析方法，其特征在于：包括以下步驟：

（1）無菌條件下輪枝鐮刀菌的樣本接種處理；

（2）無菌條件下木霉和輪枝鐮刀菌和自然條件下木霉和鐮刀菌樣本的接種處理；

（3）真菌數量的定量分析；

（4）玉米幼苗的土培；

（5）真菌孢子的接種處理；

（6）土壤酶活測定分析，獲得評價分析結果。

2.根據權利要求1所述的一種幾丁質強化木霉防控玉米輪枝鐮刀菌的評價分析方法，其特征在于，步驟（1）所述的無菌條件下輪枝鐮刀菌的樣本接種處理包括以下步驟：將土與蛭石體積比為1:1均勻混合，121 ℃，20min滅菌，65 ℃烘箱過夜干燥，干燥完成后加入滅菌處理的去離子水，保持水分含量在60%，分成若干個樣本組，其中一個樣本組加入2%幾丁質，同時加入輪枝鐮刀菌的孢子液混勻使濃度為107個/g，25 ℃避光培養，培養7 d。

3.根據權利要求1所述的一種幾丁質強化木霉防控玉米輪枝鐮刀菌的評價分析方法，其特征在于，步驟（2）中的木霉采用哈茨木霉，采用的木霉培養基包括0.2 g MgSO4·7H2O，0.9 g K2HPO4，1 g NH4NO3，0.15 g KCl，3g葡萄糖，10 mL 1/300孟加拉紅，20g瓊脂，蒸餾水補足至1000 mL，115 ℃高壓滅菌30 min；待培養基冷卻至50 ℃，添加25 mL 1%氯霉素，3mL 3%鏈霉素，0.2 g五氯硝基苯，1 mL 曲拉通，1.2 mL霜霉威，150 ppm潮霉素。

4.根據權利要求1所述的一種幾丁質強化木霉防控玉米輪枝鐮刀菌的評價分析方法，其特征在于，步驟（2）所述的無菌條件下木霉和輪枝鐮刀菌樣本的接種處理包括：將土與蛭石體積比為1:1均勻混合，115 ℃，30 min滅菌，65 ℃烘箱過夜干燥，干燥完成后加入滅好菌的去離子水，保持水分含量在60%，分成若干樣本組，其中一個樣本組加入2%幾丁質同時加入哈茨木霉使濃度為107個/g，并在加入哈茨木霉3 d后加入相同濃度的輪枝鐮刀菌，25℃避光培養7 d。

5.根據權利要求1所述的一種幾丁質強化木霉防控玉米輪枝鐮刀菌的評價分析方法，其特征在于，步驟（2）所述的自然條件下木霉和鐮刀菌樣本的接種處理包括：將土與蛭石體積比為1:1均勻混合，65 ℃烘箱過夜干燥，干燥完成后加入去離子水，保持水分含量在60%，分成若干樣本組，其中一個樣本組加入2%幾丁質，同時加入哈茨木霉，并在加入哈茨木霉107個/g，3 d后加入同樣濃度的輪枝鐮刀菌，25 ℃避光培養，分別在7 d以及14 d時取樣，同時留樣保存。

6.根據權利要求1所述的一種幾丁質強化木霉防控玉米輪枝鐮刀菌的評價分析方法，其特征在于，步驟（3）所述的真菌數量的定量分析包括菌落涂布計數，真菌母液懸浮液的制備包括：稱取固體樣品10 g，加入帶玻璃珠的100 mL的無菌水，靜置20 min，在旋轉式搖床上200 r/min充分震蕩30 min，即成母液懸浮液。

7.根據權利要求1所述的一種幾丁質強化木霉防控玉米輪枝鐮刀菌的評價分析方法，其特征在于，步驟（3）所述的真菌數量的定量分析包括qPCR定量計數。

8.根據權利要求1所述的一種幾丁質強化木霉防控玉米輪枝鐮刀菌的評價分析方法，其特征在于，步驟（4）所述玉米幼苗土培的土壤處理包括：將自然土壤與蛭石按照體積比1:1混合均勻，加入水潤濕后，保持水分在60%左右，裝入1 L的組培瓶中，每瓶350 g，處理組加入2%的幾丁質，空白對照組不加入幾丁質，施加與幾丁質相同質量的自然土壤與蛭石混合物，備用；將蛭石與石英砂按照1:1的體積比混合均勻，加入適量的水潤濕后裝入1L容量的組培瓶中，每瓶350 g，用高壓蒸汽滅菌鍋，在121 ℃、20 min條件下滅菌三次，備用。