[發明專利]松鼠葡萄球菌CY1-78及其在發酵制備溶纖酶中的應用

有效

• 申請號: 202011347963.0
• 申請日: 2020-11-26
• 公開（公告）號: CN112300970B
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 陳虹;張建芬;謝廣發;陸胤;孫亞媛
• 申請（專利權）人: 浙江樹人學院（浙江樹人大學）
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/52;C12R1/44
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;李世玉

1.一種松鼠葡萄球菌(Staphylococcus sciuri)CY1-78菌株，保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏編號：GDMCC No:61273，保藏日期2020年11月5日，地址：廣州市先烈中路100號大院59號樓5樓，郵編：510075。

2.一種權利要求1所述松鼠葡萄球菌CY1-78在發酵制備溶纖酶中的應用。

3.如權利要求2所述的應用，其特征在于所述的應用是將松鼠葡萄球菌CY1-78菌株接種入產酶培養基，于30–35℃、200–250r/min發酵24–32h，得發酵液，發酵液經過離心后去除菌體，得到溶纖酶粗酶液，再經過鹽析、透析和冷凍干燥后，獲得溶纖酶凍干粉；所述產酶培養基終濃度組成為：蛋白胨10–20g/L，麥芽浸粉5–10g/L，酵母浸出粉5–10g/L，NaCl 10g/L，MgSO₄·7H₂O 1g/L，溶劑為水，初始pH為7.2–7.4。

4.如權利要求3所述的應用，其特征在于所述松鼠葡萄球菌CY1-78菌株在產酶培養前，先經活化培養，再經種子培養，將種子液以體積濃度2％–3％的接種量接入產酶培養基，所述斜面活化培養和種子培養方法為：

(1)活化培養：將松鼠葡萄球菌CY1-78菌株接種于LB斜面培養基，于37℃培養24–36h，得到活化后的斜面菌體；所述的LB斜面培養基終濃度組成為：蛋白胨10g/L，酵母浸出粉5g/L，NaCl 10g/L，瓊脂20g/L，溶劑為水，初始pH為7.2–7.4；

(2)種子培養：接種環挑取步驟(1)活化后的斜面菌體2–3環，接種至LB液體培養基中，于35℃、200–250r/min振蕩條件下培養20–24h，得到種子液；所述LB液體培養基終濃度組成為：蛋白胨10g/L，酵母浸出粉5g/L，NaCl 10g/L，溶劑為水，初始pH為7.2–7.4。

5.如權利要求3所述的應用，其特征在于所述的產酶培養基組成為：蛋白胨20g/L，麥芽浸粉10g/L，酵母浸出粉10g/L，NaCl 10g/L，MgSO₄·7H₂O 1g/L，溶劑為水，初始pH為7.2。

6.如權利要求3所述的應用，其特征在于所述溶纖酶凍干粉按如下步驟制備：

(1)將發酵液于4℃、5000r/min離心10min，分離除去菌體，得澄清的溶纖酶粗酶液；

(2)往溶纖酶粗酶液中加入硫酸銨，使其飽和度達到30％–35％，4℃沉淀12–24h，之后于4℃、8000r/min條件下離心10min，去除沉淀，保留上清液；

(3)往步驟(2)所得的上清液中再次加入硫酸銨，使其飽和度達到65％–70％，4℃沉淀12–24h，之后于4℃、8000r/min條件下離心10min，棄去上清液，沉淀物用原溶纖酶粗酶液體積4％–5％的50mmol/L、pH 8.0Tris-HCl緩沖液溶解，得到溶纖酶濃縮液；

(4)將步驟(3)所得溶纖酶濃縮液裝入截留分子量為14kDa的透析袋中，以去離子水為透析液透析除鹽后，取截留液于–40℃、真空度≤30Pa條件下冷凍干燥，得到溶纖酶凍干粉。