[發明專利]總狀毛霉SY5-47及其在桑葉黃酮提取中的應用

有效

• 申請號: 202011347930.6
• 申請日: 2020-11-26
• 公開（公告）號: CN112574890B
• 公開（公告）日: 2022-03-15
• 發明（設計）人: 梅建鳳;莊仕航;季軍情;易喻;王旭東;應國清
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A61K36/605;A61K127/00;C12R1/785
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;李世玉

本發明公開了一種總狀毛霉SY5?47及其在桑葉黃酮提取中的應用，所述應用的方法為：桑葉粉中加入無菌生理鹽水，接種總狀毛霉SY5?47的孢子，于28–30℃發酵3–4d，發酵物經超聲乙醇提取后濃縮，獲得濃縮物，再真空干燥，獲得桑葉黃酮提取物。在桑葉超聲乙醇提取黃酮前，增加了總狀毛霉SY5?47的發酵預處理。總狀毛霉SY5?47是從桑葉微生物富集物培養物中篩選，并經誘變選育而獲得的優良菌株，在桑葉粉中適度生長而產生多糖水解酶，對桑葉細胞壁的水解，使得桑葉結構組織疏松，在超聲乙醇提取時，黃酮化合物更容易溶出，較不采用發酵預處理的超聲乙醇提取法相比，桑葉黃酮的提取收率可以提高近50％。

(一)技術領域

本發明屬于生物化工技術領域，具體涉及一種微生物發酵技術在桑葉黃酮提取中的應用。

(二)背景技術

桑葉為桑科植物桑(Morus alba L.)的葉子，是《中國藥典》收錄的傳統中藥材，具有疏散風熱，清肺潤燥，清肝明目的功能，主治風熱感冒，肺熱燥咳，頭暈頭痛，目赤昏花。現代藥理學研究表明桑葉具有抗凝、降血壓、降血糖、降血脂、抗衰老、抗腫瘤等藥理作用。桑葉的化學成分有多糖、黃酮、生物堿、維生素、胡蘿卜素和許多人體所需的氨基酸，其中黃酮類是主要有效成分之一。

桑葉黃酮具有顯著的降血糖、降血脂、抗癌和抗氧化作用，受到人們的廣泛關注。桑葉的黃酮提取物可以開發為治療糖尿病、心血管疾病和抗腫瘤的藥物或保健食品，同時，因桑葉黃酮具有很好的抗氧化作用，可以作為食品抗氧化的添加劑。近些年來，我國養蠶業的規模逐漸縮小，所以，亟需開發和利用豐富的桑葉資源。目前，國內圍繞桑葉黃酮的開發和利用開展了大量研究。

目前，常見的桑葉黃酮的提取方法包括有機溶劑浸提法、超聲輔助提取法、微波輔助提取法、CO₂超臨界萃取法、超高壓提取法和酶輔助提取法等。不同的提取工藝有各自的優缺點，黃酮的收率也差異較大。如有機溶劑浸提法的耗時長且黃酮提取收率低；CO₂超臨界萃取法和超高壓提取法可以獲得較高的提取收率，但對設備要求比較高；酶輔助提取法的提取條件溫和、活性物質不易失活，但酶的成本較高。相比之下，微波和超聲輔助提取法有相對的優勢，不會破壞黃酮結構，成本較低，提取收率相對較高。為了進一步提高桑葉黃酮的提取收率，本發明對桑葉黃酮超聲提取法工藝進行改進，增加微生物發酵預處理步驟，從而顯著提高了桑葉黃酮的提取收率。

(三)發明內容

本發明目的是提供一株新的微生物菌株—總狀毛霉(Mucorracemosus)SY5-47，及其在桑葉黃酮提取中的應用，能夠顯著提高桑葉黃酮的提取收率。

本發明采用的技術方案是：

本發明提供一株用于桑葉黃酮提取的發酵預處理菌株—總狀毛霉(Mucorracemosus)SY5-47，保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏編號：GDMCC No:61272，保藏日期2020年11月5日，地址：廣東省廣州市先烈中路100號大院59號樓5樓；郵編510070。

本發明所述總狀毛霉SY5-47，是從桑葉的微生物富集培養物中分離，經過篩選和誘變選育得到的優良菌株。所述總狀毛霉SY5-47的菌落形態特征如下：在馬鈴薯瓊脂平板培養基(PDA)上，28℃條件下培養，菌落初期為灰白色絨毛狀，隨著培養時間的延長，逐漸變為灰色，表面有黑色孢子囊；菌絲無假根；孢子囊梗單軸狀分枝，分枝不規則；孢子囊呈球形、灰褐色；孢子呈球形或短橢圓形，大小6–10μm×5–8μm。總狀毛霉SY5-47在PDA平板培養基上28℃培養2d的菌落照片見圖1；總狀毛霉SY5-47的rDNA核糖體內轉錄間隔區(rDNA-ITS)核苷酸序列為SEQ ID NO.1所示。

本發明還提供一種所述總狀毛霉SY5-47在桑葉黃酮提取中的應用，所述應用的方法為：桑葉粉中加入無菌生理鹽水，接種總狀毛霉SY5-47的孢子，于28–30℃發酵3–4d，發酵物經超聲乙醇提取后濃縮，獲得濃縮物，再真空干燥，獲得桑葉黃酮提取物。