[發明專利]一種用于鑒定奶牛基因型的引物及其應用

在審

• 申請號: 202011343894.6
• 申請日: 2020-11-26
• 公開（公告）號: CN114540505A
• 公開（公告）日: 2022-05-27
• 發明（設計）人: 張傳強;于懷林;馮欣;國鵬
• 申請（專利權）人: 內蒙古伊利實業集團股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司 11127
• 代理人: 韓蕾;李輝

本發明提供了一種用于鑒定奶牛基因型的引物及其應用。本發明的引物包括第一引物與第二引物，其中，第一引物為50～70bp且包括如SEQ ID No.1所示序列中的至少40bp的片段；第二引物為50～70bp且包括如SEQ ID No.2所示序列中的至少40bp的片段。本發明的引物對β?酪蛋白奶牛特異性較好，很好的擴增效率，可以準確判定奶牛基因型。

技術領域

本發明是關于一種用于鑒定奶牛基因型的引物及其應用，具體而言，是關于一種用于鑒定A1型、A2型β-酪蛋白奶牛的引物，含有所述引物的試劑盒，以及鑒定奶牛β-酪蛋白基因型方法。

背景技術

β-酪蛋白是人乳和牛乳中的一種主要蛋白。牛乳中β-酪蛋白約占總蛋白重量的30％，含有多種人體必需的氨基酸。牛乳中的β-酪蛋白有兩種主要的變異型：A1型和A2型。A1型和A2型β-酪蛋白的區別在于第67位的氨基酸不同。A1型β-酪蛋白的第67位為組氨酸，其前7個氨基酸殘基可以被裂解產生β-酪啡肽-7。已有研究報道，β-酪啡肽-7可能與嬰幼兒的各種疾病有關，例如I型糖尿病和呼吸功能障礙等，并影響中樞神經系統活動。A2型β-酪蛋白的第67位為脯氨酸，無法產生此類裂解。人乳β-酪蛋白的結構與牛乳A2型β-酪蛋白結構較為相似，也無法裂解。除A1型和A2型外，牛乳β-酪蛋白根據其基因不同SNPs還存在A3、B、C、E、F、H1、I等多種變異型。

因此，區分不同型β-酪蛋白牛乳、奶牛具有重要意義。

CN105219839A和CN105018582A均公開了一種檢測β-酪蛋白基因型的方法，是利用特異性引物進行PCR，擴增片段經限制性內切酶酶切后，經瓊脂糖凝膠電泳的條帶結果進行A1和A2型的β-酪蛋白分型，然而有報道該方法成本較高、假陽性率高，后期仍需要進行測序確認。

CN105925717A公開了一種檢測A1和A2型β-酪蛋白奶牛的方法，其中是基于beta-casein基因(Ensembl參考序列ENSBTAT00000003409)c.245CA突變，并利用PCR-RFLP技術在上游引物(beta-caseinF)上創造了一個突變位點，設計得到可以擴增產生EcoT22I酶切位點的引物，通過對PCR擴增產物進行酶切并進行凝膠電泳，依據酶切結果鑒定奶牛基因型。該方法酶切后產生的反應產物包含較小的49bp，以及相近的385bp與434bp，容易導致電泳條帶區分顯示不清晰。

CN107287292B公開了一種同時檢測奶牛β-酪蛋白A1、A2、A3、B、C、E、F、H1和I變體型的方法，其中設計了多重PCR擴增引物和多重連接酶檢測反應探針。該方法為多重PCR反應，對反應條件要求苛刻。

發明內容

本發明的一個目的在于提供一種用于鑒定奶牛基因型的引物。

本發明的另一目的在于提供所述引物的應用。

一方面，本發明提供了一種用于鑒定奶牛基因型的引物，其包括第一引物與第二引物，其中，第一引物為20～70bp且包括如SEQ ID No.1所示序列中的連續的至少20bp的片段；第二引物為20～70bp且包括如SEQ ID No.2所示序列中的連續的至少20bp的片段。

SEQ ID No.1(5’-3’)：caagagaagtagtgctagaagttggccattgttaaggaactccttgaattaaaaaaacac；

SEQ ID No.2(5’-3’)：cagattttca acatcagtgagagtcaggctctggctttcagtaaagggctcaactggata。

根據本發明的具體實施方案，本發明的用于鑒定奶牛基因型的引物，其中：

第一引物為50～70bp且包括如SEQ ID No.1所示序列中的連續的至少40bp的片段；第二引物為50～70bp且包括如SEQ ID No.2所示序列中的連續的至少40bp的片段。