[發明專利]一種犬促甲狀腺激素檢測試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請號: 202011342858.8
• 申請日: 2020-11-26
• 公開（公告）號: CN112540181A
• 公開（公告）日: 2021-03-23
• 發明（設計）人: 李婷;馮小龍;孫云雷;張施羽;錢翀;王蓉蓉
• 申請（專利權）人: 愛若維生物科技（蘇州）有限公司
• 主分類號: G01N33/76
• 分類號: G01N33/76;G01N33/577;G01N33/58;G01N33/543;G01N33/535;C07K16/26
• 代理公司: 蘇州威世朋知識產權代理事務所(普通合伙) 32235
• 代理人: 楊林潔

本發明涉及一種犬促甲狀腺激素檢測的試劑盒，包括微孔板、酶標液、封閉試劑、顯色試劑、樣品稀釋液、標準樣品和終止試劑，其中，所述微孔板上預包被犬促甲狀腺激素單克隆抗體Ⅰ，所述酶標液為HRP標記的犬促甲狀腺激素單克隆抗體Ⅱ，還提供了所述犬促甲狀腺激素檢測試劑盒的檢測方法，應用該種試劑盒能夠快速、準確的檢測出犬血液中的犬促甲狀腺激素，成本低，對臨床檢測有重要意義，市場應用前景廣闊。此外，本發明檢測通量高，在樣本數量多的情況下比免疫層析試紙條檢測效率更高，有較強的經濟效益，特別適合犬養殖單位和寵物醫院使用。

技術領域

本發明屬于生物檢測技術領域，尤其涉及一種犬促甲狀腺激素檢測試劑盒及其檢測方法。

背景技術

犬促甲狀腺激素(縮寫:TSH)是由腺垂體分泌的激素，主要負責調節甲狀腺細胞的增殖、甲狀腺血液供應以及甲狀腺激素的合成和分泌，在維持正常甲狀腺功能中起最重要的調節作用。腺垂體中TSH分泌主要受到互相拮抗的兩種機制的精細調控：一方面，下丘腦分泌的TSH釋放激素(TRH)可以促進腺垂體中TSH分泌；另一方面，甲狀腺激素(T3、T4)可以反饋性地抑制腺垂體中TSH分泌。當甲狀腺功能改變時，游離甲狀腺濃度的微小變化就會帶來TSH濃度向反方向的顯著調整，甲狀腺激素水平15％-20％的改變可引起TSH水平50％-100％的變化。因此，TSH檢測是衡量甲狀腺功能的重要初篩試驗，血清或血漿中TSH的含量變化是甲狀腺疾病篩查和診斷過程中可依據的重要指標。

目前，TSH含量檢測常用的方法包括：免疫放射分析法、酶聯免疫分析法、化學發光免疫分析法、電化學發光免疫分析法和膠體金免疫層析法等。國內醫院檢驗科通常采用化學發光免疫分析法和電化學發光免疫分析法來測定血清或者血漿中TSH水平，這兩種方法精準性較高但需要大型精密儀器及專業操作人員；免疫放射分析法檢測時間長，致使臨床價值受到很大的限制，已基本退出市場；膠體金免疫層析法檢測速度快，但是靈敏度不高，檢測通量低，不適合樣本量大(100樣)的時候使用。酶聯免疫分析法將酶催化反應的放大作用和抗原抗體親和反應的高度專一性、特異性相結合，以酶標記的抗原或抗體作為主要試劑進行免疫測試，具有檢測速度快、費用低廉、儀器簡單易攜等優點，可用于現場檢驗，但是酶聯免疫分析法的靈敏度和特異性還有待于提高。

發明內容

本發明的目的在于創新出一種靈敏度高、檢測通量大、成本低制備方便的的犬促甲狀腺激素檢測的試劑盒，應用于寵物醫院和犬生產繁殖單位使用，使得促甲狀腺激素的檢測簡潔、準確和高效，從而指導生產實踐。

為實現上述目的，本申請提供了一種犬促甲狀腺激素檢測的試劑盒，包括微孔板、酶標液、封閉試劑、顯色試劑、樣品稀釋液、標準樣品和終止試劑，其中，所述微孔板上預包被犬促甲狀腺激素單克隆抗體Ⅰ，所述酶標液為HRP標記的犬促甲狀腺激素單克隆抗體Ⅱ。

作為本申請的進一步改進，所述犬促甲狀腺激素單克隆抗體Ⅰ由犬促甲狀腺激素重組抗原Ⅰ經免疫制備而得；所述犬促甲狀腺激素單克隆抗體Ⅱ由犬促甲狀腺激素重組抗原Ⅱ經免疫制備而得。

作為本申請的進一步改進，所述犬促甲狀腺激素單克隆抗體Ⅰ是經如下免疫方法制備而得：S1、將200μg犬促甲狀腺激素重組抗原Ⅰ與弗氏完全佐劑等量混合均勻，乳化后，向選用的第一只6周齡Balb/c雌小鼠的腹腔內注射100μl，每隔2～3周，對選用的所述第一只6周齡Balb/c雌小鼠進行加強免疫；S2、以純犬促甲狀腺激素重組抗原Ⅰ注射小鼠腹腔和尾靜脈各50μg，3d后取所述第一只6周齡Balb/c雌小鼠的脾細胞，無菌條件下，將所述第一只6周齡Balb/c雌小鼠的脾細胞和SP2/0細胞進行融合，使融合后的細胞在HAT培養基中生長，置于有飼養層細胞的培養板中；S3、通過陽性克隆篩選和克隆化培養得到雜交瘤細胞株Ⅰ，將所述雜交瘤細胞株Ⅰ接種于預先用誘導劑處理的第二只6周齡Balb/c雌小鼠，收取腹水，純化后，用ELISA法測定抗體效價，得到犬促甲狀腺激素單克隆抗體I。