[發(fā)明專利]一種引物探針組及其應(yīng)用和一種檢測(cè)蜜蜂慢性麻痹病毒的試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011338417.0
• 申請(qǐng)日: 2020-11-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112458206A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-03-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張?bào)w銀;鄭騰;黃嫦嬌;王武軍;張志燈;于師宇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福州海關(guān)技術(shù)中心
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京睿智保誠(chéng)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11732
• 代理人: 周新楣

1.一種引物探針組，其特征在于，所述引物探針組包括上游引物、下游引物和TaqMan探針；所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示，所述TaqMan探針的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.如權(quán)利要求1所述的引物探針組，其特征在于，所述TaqMan探針5’端標(biāo)記有熒光報(bào)告基團(tuán)FAM，3’端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán)BHQ1。

3.一種權(quán)利要求1或2所述的引物探針組在制備檢測(cè)蜜蜂慢性麻痹病毒試劑盒中的應(yīng)用。

4.一種檢測(cè)蜜蜂慢性麻痹病毒的試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求1或2所述的引物探針組。

5.如權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括陽(yáng)性對(duì)照品、陰性對(duì)照品、10×RT-PCR buffer緩沖液、MgCl₂、dNTPs、DNA聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶和RNA抑制劑。

6.如權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述陽(yáng)性對(duì)照品為含有目的片段的陽(yáng)性克隆質(zhì)粒，所述目的片段如SEQ ID NO.4所示；所述陰性對(duì)照品為無(wú)核酸酶水。

7.如權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于，在實(shí)時(shí)熒光RT-PCR的反應(yīng)體系中的配置為：10×RT-PCR buffer 2μL，25mmol/L MgCl₂ 2μL，2.5mmol/L dNTPs 1.5μL，10μmol/L上下游引物各0.5μL，10μmol/L探針0.5μL，5U/μL DNA聚合酶0.5μL，5U/μL逆轉(zhuǎn)錄酶0.5μL，40U/μL RNA酶抑制劑0.5μL，待測(cè)樣品RNA 2μL，然后加入無(wú)核酸酶水9.5μL，使反應(yīng)總體積為20.0μL。

8.如權(quán)利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述實(shí)時(shí)熒光RT-PCR的反應(yīng)程序?yàn)椋?0℃反轉(zhuǎn)錄30min；95℃預(yù)變性5min；95℃變性15s，55～65℃退火30s，共40～45個(gè)循環(huán)。