[發明專利]植物中花青素類化合物的液質聯用分析方法

在審

• 申請號: 202011333200.0
• 申請日: 2020-11-24
• 公開（公告）號: CN112611812A
• 公開（公告）日: 2021-04-06
• 發明（設計）人: 許琳;唐堂;孟慧曉;鄭彬
• 申請（專利權）人: 嘉興邁維代謝生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 北京中知星原知識產權代理事務所(普通合伙) 11868
• 代理人: 馬如

本發明涉及一種植物中花青素類化合物的液質聯用分析方法，包括如下步驟：制備待測植物樣品溶液，在特定的色譜條件和質譜條件下采用LC?MS/MS檢測分析，根據花青素類化合物的定性Q1/Q3離子對和保留時間，確定待測植物中是否含有花青素類化合物。該液質聯用分析方法可適用于不同植物樣本中花青素類物質的快速分析。

技術領域

本發明涉及檢測分析技術領域，尤其涉及一種植物中花青素類化合物的液質聯用分析方法。

背景技術

花青素(anthocyanidin)是一類廣泛存在于植物中的水溶性色素，屬于類黃酮化合物，也是植物的主要呈色物質；花青素作為一種天然食用色素，安全、無毒、資源豐富，而且具有一定營養和藥理作用，在食品、化妝、醫藥等方面有著巨大的應用潛力。有實驗表明，花青素是迄今為止所發現的最強效的自由基清除劑，具有保健功能，近年來也越來越受到關注。自然條件下游離的花青素極少見，主要以糖苷形式存在，常與一個或多個葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖等結合成花色苷(anthocyanin)；且從植物中分離出的花青素極不穩定，易受酸堿度、溫度、自身濃度、光、氧、酶、輔因子、微生物和金屬離子等的影響而降解。

目前已發現的花青素類物質有500多種，其多樣性賦予花青素廣泛的生物活性，但同時也增加了其分析鑒定的難度。目前，常用于花青素類物質分析的方法主要有紫外－可見光譜法、高效液相色譜法(HPL)、質譜技術(MS)、核磁共振波譜法(NMR)、紙層析法(PC)、薄層層析法(TLC)、毛細管區帶電泳法(PCE)、紅外吸收光譜法(IR)和近紅外吸收光譜法(NIR)等，這些方法均有各自的優勢和局限性。

目前，商業化的花青素類物質標準品較少，因此，通常無法直接通過絕對定量的方式對植物中的花青素類物質進行一一定量檢測分析。

HPLC-MS結合了高效液相色譜的強分離能力與質譜的強鑒定能力，具有分析結果準確、檢出限低的特點，克服了花色苷標準品缺少問題，適用于低含量花青素的定性和定量檢測，廣泛用于結構復雜的花青素，如原矢車菊素、原花青素、原花翠素和單寧等結構的鑒定與分析。有研究利用HPLC-MS 發現，紫玉米中主要存在6種花青素，分別為矢車菊色素-3-葡萄糖苷、天竺葵色素-3-葡萄糖苷、芍藥色素-3-葡萄糖苷及與這3種花青素相應的丙二酸鹽衍生物。不過，由于花青素僅在低pH條件下(pH3)比較穩定，而低 pH值將抑制電噴霧質譜的離子化，這影響了質譜分析的效果，導致該聯用技術的應用受到限制。

發明內容

基于此，有必要提供一種花青素類化合物的液質聯用分析方法，能夠適用于不同植物樣本中花青素類物質的快速定性及半定量分析。

本發明解決上述技術問題的技術方案如下：

本發明提供一種植物中類花青素類化合物的液質聯用分析方法，包括如下步驟：

確定采用LC-MS/MS檢測分析的參數條件，色譜條件：采用反向色譜柱，柱溫30℃～35℃，流動相A為含0.1％～1％甲酸的水溶液，流動相B為含 0.1％～1％甲酸的乙腈溶液，采用梯度洗脫方式；質譜條件：采用正離子模式和MRM掃描模式；

制備待測植物樣品溶液，按照所述色譜條件和所述質譜條件上機測試；

根據花青素類化合物的至少兩對定性Q1/Q3離子對信息確定待測植物中是否含有花青素類化合物。

若待測植物中含有花青素類化合物，則采用花青素類化合物標準品，建立標準曲線法測定所述待測植物中花青素類化合物的含量。

優選地，所述反向色譜柱為BEH C18柱，所述柱溫為35℃，所述流動相A為含0.1％～1％甲酸的水溶液，流動相B為含0.1％～1％甲酸的乙腈溶液，所述梯度洗脫程序為：

0min，流動相A與流動相B的體積比為95:5；

6min，流動相A與流動相B的體積比為50:50；