[發明專利]植物中花青素類化合物的液質聯用分析方法

在審

• 申請號: 202011333200.0
• 申請日: 2020-11-24
• 公開（公告）號: CN112611812A
• 公開（公告）日: 2021-04-06
• 發明（設計）人: 許琳;唐堂;孟慧曉;鄭彬
• 申請（專利權）人: 嘉興邁維代謝生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 北京中知星原知識產權代理事務所(普通合伙) 11868
• 代理人: 馬如

1.一種植物中花青素類化合物的液質聯用分析方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)確定采用LC-MS/MS檢測分析的參數條件，色譜條件：采用反向色譜柱，柱溫30℃～35℃，流動相A為含甲酸的水溶液，流動相B為含甲酸的乙腈溶液，采用梯度洗脫方式；

質譜條件：采用正離子模式和MRM掃描模式；

2)制備待測植物樣品溶液，按照所述色譜條件和所述質譜條件上機測試；

3)根據花青素類化合物的定性Q1/Q3離子對和保留時間確定待測植物中是否含有花青素類化合物。

2.根據權利要求1所述的植物中花青素類化合物的液質聯用分析方法，其特征在于，所述步驟1)中反向色譜柱為BEH C18柱，所述柱溫為35℃，所述流動相A為含0.1％～1％甲酸的水溶液，流動相B為含0.1％～1％甲酸的乙腈溶液。

3.根據權利要求2所述的植物中花青素類化合物的液質聯用分析方法，其特征在于，所述步驟1)中梯度洗脫程序為：

0min，流動相A與流動相B的體積比為95:5；

6min，流動相A與流動相B的體積比為50:50；

12min，流動相A與流動相B的體積比為5:95；

14min，流動相A與流動相B的體積比5:95；

14.1min，流動相A與流動相B的體積比95:5；

16min，流動相A與流動相B的體積比為95:5。

4.根據權利要求1所述的植物中花青素類化合物的液質聯用分析方法，其特征在于，所述質譜條件為：ESI離子源，離子源溫度為550℃，氣簾氣壓力為35psi，輔助加熱氣Gas1壓力為50psi，輔助加熱氣Gas2壓力為60psi，碰撞氣壓力為Medium，MRM監測窗口為65s。

5.根據權利要求1至4任一項所述的植物中花青素類化合物的液質聯用分析方法，其特征在于，還包括采用花青素類化合物標準品建立標準曲線法測定所述待測植物中花青素類化合物含量的步驟。

6.根據權利要求1至4任一項所述的植物中花青素類化合物的液質聯用分析方法，其特征在于，所述步驟3)中定性Q1/Q3離子對的建立方法包括如下步驟：

根據已知分子結構的花青素類化合物的母核結構以及其母核與葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖等結合形式，推導理論上可形成的花青素類化合物的分子結構及其分子量；

按照權利要求1至4任一項所述的參數條件，對已知花青素類化合物進行LC-MS/MS分析，確定主要裂解碎片信息，計算所述理論上可形成的花青素類化合物的所有理論二級碎片信息，并與母離子組合，推導該檢測參數條件下的所有理論Q1/Q3離子對；

根據同類型花青素母核所連接糖類的不同,其保留時間的偏移呈現一定的規律,可根據此規律推測相對應無標品的花青素類化合物的保留時間，并通過化合物結構的裂解規律，確定所述定性Q1/Q3離子對信息。

7.根據權利要求1至4任一項所述的植物中花青素類化合物的液質聯用分析方法，其特征在于，所述步驟2)制備待測植物樣品溶液包括如下步驟：

將植物樣品研磨成粉末，按照重量體積比1：(10～20)加入提取溶劑，所述提取溶劑為含0.05％～0.15％鹽酸以及體積比(2～4):(8～6)的水、甲醇的混合溶劑，渦旋后超聲提取，離心，收集上清液，即得。

8.根據權利要求7所述的植物中花青素類化合物的液質聯用分析方法，其特征在于，所述提取工藝條件為：室溫下渦旋提取2～3次，超聲提取2～3次，每次5-15min。

9.權利要求1-8任一項所述的植物中花青素類化合物的液質聯用分析方法在分析鑒定植物中花青素類物質中的應用。

10.權利要求9所述的應用，其中分析鑒定為定性或定量分析。