[發明專利]一種人源化降糖多肽、其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202011325365.3
• 申請日: 2020-11-24
• 公開（公告）號: CN114539380A
• 公開（公告）日: 2022-05-27
• 發明（設計）人: 王傳貴;孫蓮慧;張勝萍;范廣建
• 申請（專利權）人: 上海市第一人民醫院
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K19/00;C12N15/70;C07K1/22;C07K1/14;C07K1/34;C07K1/36;A61K38/17;A61P3/10;C12R1/19
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 呂薇

1.一種人源化降糖多肽，其特征在于，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示。

2.根據權利要求1所述的一種人源化降糖多肽，其特征在于，所述人源化降糖多肽為以下任一項：

(a)氨基酸序列為SEQ ID NO：1所示的多肽；

(b)如SEQ ID NO：1所示氨基酸序列任意的甲基化或酰基化衍生物。

3.一種穿膜肽段，其特征在于，含有如序列表SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

4.根據權利要求3所述的一種穿膜肽段，其特征在于，所述穿膜肽段包括以如序列表SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列為基本骨架，進行延伸、縮短、氨基酸替換、氨基酸修飾所得的肽段，作為穿膜載體。

5.根據權利要求1所述的降糖多肽的制備方法，其特征在于，通過基因工程的方法人工合成。

6.根據權利要求5所述的降糖多肽的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)構建蛋白純化所需要的質粒His-CAP1-204-303aa，測序正確以后將其轉化到Transetta菌株中，挑取單克隆，做小誘，摸索蛋白誘導的最佳條件；

(2)按照步驟(1)摸索的蛋白誘導的最佳條件，擴大培養進行大誘；將活化的菌液加入到LB培養基中，在37℃中220rpm搖至OD值為0.6，加入IPTG，然后將搖床溫度調至25℃，8小時后收取菌液；

(3)將菌液離心后，加入lysis buffer、溶菌酶、PMSF、DTT，冰上靜止15分鐘后，用超聲儀進行超聲，超聲程序為超聲3秒、停7秒，重復超聲90次；

(4)將超聲完成的裂解液高速離心，收集上清于新的100ml離心管中，加入偶聯鎳的beads，放到4度冰箱中，用靜音混勻器搖2-4小時；

(5)將溶液過柱，然后用wash buffer沖洗3遍；

(6)用Elution buffer將蛋白質洗脫下來，用PBS在4度冰箱進行透析，測濃度，檢測所純化蛋白的質量。

7.根據權利要求1或2任一項所述的降糖多肽的應用，其特征在于，降低細胞內葡萄糖含量。

8.根據權利要求1或2任一項所述的降糖多肽在制備治療和/或預防糖尿病藥物中的應用。

9.一種降糖產品，其特征在于，包括含有權利要求1或2所述的降糖多肽或降糖多肽的衍生物，所述降糖多肽的衍生物是指在如序列表SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列進行甲基化或酰基化得到的衍生物，或者以如序列表SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列為基本骨架，進行延伸、縮短、氨基酸替換、氨基酸修飾得到的衍生物。

10.根據權利要求9所述的一種降糖產品，其特征在于，所述降糖產品包括權利要求1或2所述降糖多肽及其修飾得到的衍生物以及藥學上可以接受的載體。