[發(fā)明專利]滑膜肉瘤類器官的培養(yǎng)方法和培養(yǎng)基以及移植體及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011323451.0
• 申請日: 2020-11-23
• 公開（公告）號: CN112481214B
• 公開（公告）日: 2022-07-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃穩(wěn)定;嚴(yán)望軍;李程;肖金平;程默;蔡維濼;孫志堅(jiān);康平
• 申請（專利權(quán)）人: 北京科途醫(yī)學(xué)科技有限公司;浙江科途醫(yī)學(xué)科技有限公司
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;A01K67/027
• 代理公司: 北京英創(chuàng)嘉友知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11447
• 代理人: 耿超

本公開涉及一種培養(yǎng)滑膜肉瘤類器官的方法，該方法包括：依次利用分離培養(yǎng)基和擴(kuò)增培養(yǎng)基對滑膜肉瘤組織細(xì)胞進(jìn)行分離、擴(kuò)增培養(yǎng)，得到擴(kuò)增培養(yǎng)產(chǎn)物；其中，所述分離培養(yǎng)基中含有丙戊酸，以所述分離培養(yǎng)基為基準(zhǔn)，所述丙戊酸的濃度為2～3mmol/l，優(yōu)選為2.4～2.8mmol/l；所述擴(kuò)增培養(yǎng)基中含有丙戊酸，以所述擴(kuò)增培養(yǎng)基為基準(zhǔn)，所述丙戊酸的濃度為0.5～1.5mmol/l，優(yōu)選為0.8～1.2mmol/l；對所述擴(kuò)增培養(yǎng)產(chǎn)物進(jìn)行分離處理，得到細(xì)胞沉淀；利用所述擴(kuò)增培養(yǎng)基對所述細(xì)胞沉淀進(jìn)行傳代培養(yǎng)，得到傳代培養(yǎng)產(chǎn)物；獲取所述傳代培養(yǎng)產(chǎn)物中的固體部分，得到滑膜肉瘤類器官。

技術(shù)領(lǐng)域

本公開涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種培養(yǎng)滑膜肉瘤類器官的方法，用于滑膜肉瘤類器官培養(yǎng)的培養(yǎng)基，一種用于構(gòu)建滑膜肉瘤異種移植模型的移植體及其用途，以及一種生產(chǎn)滑膜肉瘤異種移植小鼠模型的方法。

背景技術(shù)

滑膜肉瘤是一種源于滑膜細(xì)胞或分化成化膜細(xì)胞的間充質(zhì)細(xì)胞的惡性軟組織腫瘤，約占軟組織腫瘤的7％～10％。據(jù)報道，90％的滑膜肉瘤患者的年齡小于50歲，大多數(shù)為15～35歲，且男性居多。目前，滑膜肉瘤的治療手段以手術(shù)治療為主，但是，約有50％的患者在術(shù)后2周內(nèi)出現(xiàn)復(fù)發(fā)，約有40％的患者出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，因此滑膜肉瘤的手術(shù)治療效果不佳，而且，滑膜肉瘤患者的5年生存率僅為36％～76％，10年生存率僅為20％～63％。因此，需要開發(fā)新的針對滑膜肉瘤的治療方案，以提升滑膜肉瘤的治療效果，進(jìn)一步提升滑膜肉瘤患者的生存期限。

相關(guān)技術(shù)中，基于滑膜肉瘤細(xì)胞系或動物模型來進(jìn)行滑膜肉瘤治療方案的研究與開發(fā)。但是，滑膜肉瘤細(xì)胞系的多樣性有限，與滑膜肉瘤組織的生物學(xué)特性的差異較大；滑膜肉瘤數(shù)量較少，獲取難度較大，導(dǎo)致難以大批量構(gòu)建滑膜肉瘤動物模型，且滑膜肉瘤動物模型的構(gòu)建周期長、成瘤率低、成瘤體積小。

因此，亟需一種與滑膜肉瘤組織的生物學(xué)特性及遺傳分子信息更接近的滑膜肉瘤生物模型。

發(fā)明內(nèi)容

本公開的目的是提供一種培養(yǎng)滑膜肉瘤類器官的方法，用于滑膜肉瘤類器官培養(yǎng)的培養(yǎng)基，一種用于構(gòu)建滑膜肉瘤異種移植模型的移植體及其用途，以及一種生產(chǎn)滑膜肉瘤異種移植小鼠模型的方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，第一方面，本公開提供一種培養(yǎng)滑膜肉瘤類器官的方法，該方法包括：

依次利用分離培養(yǎng)基和擴(kuò)增培養(yǎng)基對滑膜肉瘤組織細(xì)胞進(jìn)行分離、擴(kuò)增培養(yǎng)，得到擴(kuò)增培養(yǎng)產(chǎn)物；其中，所述分離培養(yǎng)基中含有丙戊酸，以所述分離培養(yǎng)基為基準(zhǔn)，所述丙戊酸的濃度為2～3mmol/l，優(yōu)選為2.4～2.8mmol/l；所述擴(kuò)增培養(yǎng)基中含有丙戊酸，以所述擴(kuò)增培養(yǎng)基為基準(zhǔn)，所述丙戊酸的濃度為0.5～1.5mmol/l，優(yōu)選為0.8～1.2mmol/l；

對所述擴(kuò)增培養(yǎng)產(chǎn)物進(jìn)行分離處理，得到細(xì)胞沉淀；

利用所述擴(kuò)增培養(yǎng)基對所述細(xì)胞沉淀進(jìn)行傳代培養(yǎng)，得到傳代培養(yǎng)產(chǎn)物；

獲取所述傳代培養(yǎng)產(chǎn)物中的固體部分，得到滑膜肉瘤類器官。

可選地，所述分離培養(yǎng)基中還含有5～20體積％的FBS、50～200U/ml的penicillinG、50～200mg/ml的鏈霉素，1～10體積％的B27、1～10mM的Nicotinamide、1～20μM的Y-27632、10～50μM的EGF、10～50μM的bFGF和余量的Leibovitz，s L-15Medium培養(yǎng)基；

所述擴(kuò)增培養(yǎng)基中還含有5～20體積％的FBS、50～200U/ml的penicillin G、50～200mg/ml的鏈霉素，1～10體積％的B27、1～10mM的Nicotinamide、10～50μM的EGF、10～50μM的bFGF和余量的Leibovitz，s L-15Medium培養(yǎng)基；

可選地，所述依次利用分離培養(yǎng)基和擴(kuò)增培養(yǎng)基對滑膜肉瘤組織細(xì)胞進(jìn)行分離、擴(kuò)增培養(yǎng)，得到擴(kuò)增培養(yǎng)產(chǎn)物，包括：