[發明專利]一種高靈敏度的cTnI檢測方法及其試劑盒

在審

• 申請號: 202011321985.X
• 申請日: 2020-11-23
• 公開（公告）號: CN112505332A
• 公開（公告）日: 2021-03-16
• 發明（設計）人: 章觀雄
• 申請（專利權）人: 廈門寶太生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/532
• 代理公司: 廣州科沃園專利代理有限公司 44416
• 代理人: 張帥

本發明屬于cTnI檢測方法技術領域，具體涉及一種高靈敏度的cTnI檢測方法及其試劑盒。本發明提供的檢測方法，利用均相化學發光平臺技術引入檸檬酸三鈉、乙二胺四乙酸(EDTA)等解離劑，將cTnI?cTnC二聚體解離成單個cTnI，保證檢測樣本中的cTnI均為游離狀態，表位暴露完全，降低假陰性風險；使得樣本中cTnI含量升高；從而提高檢測靈敏度。與傳統方法相比，本發明提供的檢測方法免疫反應時間短，儀器要求低，試劑靈活性強，有利于產品的運輸、保存及操作。

技術領域

本發明屬于cTnI檢測方法技術領域，具體涉及一種高靈敏度的cTnI檢測方法及其試劑盒。

背景技術

目前cTnI常用的檢測技術有：膠體金法、酶聯免疫法(ELISA)、熒光免疫層析、化學發光法等。膠體金法是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的一種新型的免疫標記技術，膠體金除了與蛋白質結合以外，還可以與許多其它生物大分子結合，如SPA、PNA、ConA等；ELISA已成為目前分析化學領域中的前沿課題，它是一種特殊的試劑分析方法，是在免疫酶技術的基礎上發展起來的一種新型的免疫測定技術；熒光免疫層析技術是基于抗原抗體特異性免疫反應的新型膜檢測技術，以固定有檢測線(包被抗體或包被抗原)和質控線(抗抗體)的條狀纖維層析材料為固定相，測試液為流動相，熒光標記抗體或抗原固定于連接墊，通過毛細管作用使待分析物在層析條上移動；化學發光法是利用化學發光測定化學發光反應反應物、催化劑、增敏劑、抑制劑，偶合反應中的反應物、催化劑、增敏劑的方法。

由于cTnI檢測存在多種影響因素，從而造成不同平臺的試劑檢測靈敏度參差不齊，時有漏檢情況出現；

(1)cTnI穩定性差：研究發現,cTnI較不穩定，易受蛋白水解酶作用,且不同部分受影響的程度有差別，N端和C端易被降解；

(2)cTnI存在形式多樣：游離或結合形式存在的cTnI，其抗原表位的空間構象可能會有不同，當待測樣本中的cTnI存在的形式為結合形式時，cTnI表位易被遮擋，從而使得樣本中可被檢測到的cTnI濃度降低(cTnI多以結合形式為主，90％以上是cTnI-cTnC二聚體)；

傳統的化學發光法是靈敏度相對較高的，它克服了信號上的干擾及手工操作的影響因素而大大提高了檢測靈敏度，但仍然存在洗滌分離等多步驟，從而造成檢測時間長，無法滿足快速檢測的需求，而對于現階段cTnI超敏需求，檢測靈敏度仍然需要提升。

發明內容

針對現有技術普遍存在的缺陷，本發明提供了一種高靈敏度的cTnI檢測方法及其試劑盒。本發明提供的檢測方法，引入了解離試劑，使得樣本中cTnI含量升高，可保證檢測樣本中的cTnI均為游離狀態，表位暴露完全，降低假陰性風險，提高檢測靈敏度。

為了達到上述目的，本發明采用的技術方案為：

一種cTnI檢測試劑盒，由受體微球-抗體復合物、供體微球-親和素復合物、生物素化抗體復合物、試劑保存緩沖液組成。

優選地，所述受體微球-抗體復合物的制備方法，包括以下步驟：

(1)受體微球前處理：吸取質量濃度為10mg/mL的微球混懸液，置于高速離心機中，離心去上清；添加2倍微球懸濁液體積的純化水；超聲混勻清洗，高速離心去上清；接著用0.05M PH5.0 MES緩沖液懸浮至10mg/mL備用；

(2)將步驟(1)中的微球按照微球、EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽)、NHS(N-羥基琥珀酰亞胺)質量比為2：1：1的方式混合，并用所述MES緩沖液將微球懸浮至5mg/mL，30℃旋轉反應30min，純化水清洗兩次；用0.05M PH 8.0HEPES緩沖液，懸浮至10mg/mL備用；