[發(fā)明專利]一種高靈敏度的cTnI檢測(cè)方法及其試劑盒

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011321985.X
• 申請(qǐng)日: 2020-11-23
• 公開（公告）號(hào): CN112505332A
• 公開（公告）日: 2021-03-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 章觀雄
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廈門寶太生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/58;G01N33/532
• 代理公司: 廣州科沃園專利代理有限公司 44416
• 代理人: 張帥

1.一種cTnI檢測(cè)試劑盒，其特征在于，由受體微球-抗體復(fù)合物、供體微球-親和素復(fù)合物、生物素化抗體復(fù)合物、試劑保存緩沖液組成。

2.如權(quán)利要求1所述的cTnI檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述受體微球-抗體復(fù)合物的制備方法，包括以下步驟：

(1)受體微球前處理：吸取質(zhì)量濃度為10mg/mL的微球混懸液，置于高速離心機(jī)中，離心去上清；添加2倍微球懸濁液體積的純化水；超聲混勻清洗，高速離心去上清；接著用0.05MPH5.0 MES緩沖液懸浮至10mg/mL備用；

(2)將步驟(1)中的微球按照微球、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺按質(zhì)量比為2：1：1的方式混合，并用所述MES緩沖液將微球懸浮至5mg/mL，30℃旋轉(zhuǎn)反應(yīng)30min，純化水清洗兩次；用0.05M PH8.0HEPES緩沖液，懸浮至10mg/mL備用；

(3)將步驟(2)中的微球與受體微球標(biāo)記相應(yīng)受體微球標(biāo)記抗體以20：1的質(zhì)量比混合并用所述HEPES緩沖液懸浮微球至5mg/mL，在避光條件下30℃旋轉(zhuǎn)孵育2h，后加入0.01％BSA再孵育30min，離心去上清，用PBST(PH 7.4,0.5％吐溫20)清洗兩次，用0.05M PH7.4TRIS緩沖液懸浮至20mg/mL于2-8℃保存?zhèn)溆谩?/p>

3.如權(quán)利要求2所述的cTnI檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述受體微球-抗體復(fù)合物的制備方法的步驟(1)中的高速離心的具體操作為于12000rpm的轉(zhuǎn)速下離心20min。

4.如權(quán)利要求1所述的cTnI檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述供體微球-親和素復(fù)合物的制備方法，包括如下步驟：

(1)供體微球前處理：吸取質(zhì)量濃度為10mg/mL的微球混懸液于高速離心機(jī)中，離心去上清；添加2倍微球懸濁液體積的純化水；超聲混勻清洗，高速離心去上清；接著用0.05MPH5.0 MES緩沖液懸浮至10mg/mL備用；

(2)將步驟(1)中微球按照微球、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺按照質(zhì)量比為2:1:1的方式混合并用MES緩沖液將微球懸浮至5mg/ml，30℃旋轉(zhuǎn)反應(yīng)30min，純化水清洗兩次；用0.05M PH 9.0Na₂HPO₄緩沖液懸浮至10mg/mL備用；

(3)將步驟(2)中的微球與鏈霉親和素以20:1的質(zhì)量比混合，并用所述Na₂HPO₄緩沖液懸浮微球至5mg/mL，在避光條件下30℃旋轉(zhuǎn)孵育4h，后加入0.01％BSA再孵育30min，離心去上清，用PBST(PH 7.4,0.5％吐溫20)清洗兩次，用0.05M PH 7.4TRIS緩沖液懸浮至20mg/mL于2-8℃保存?zhèn)溆谩?/p>

5.如權(quán)利要求4所述的cTnI檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述供體微球-親和素復(fù)合物的制備方法中步驟(1)的高速離心具體操作為于12000rpm的轉(zhuǎn)速下離心20min。

6.如權(quán)利要求1所述的cTnI檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述生物素化抗體復(fù)合物的制備方法，包括以下步驟：

(1)生物素準(zhǔn)備：將購(gòu)置的生物素凍干粉用DMSO復(fù)溶至1mg/mL；

(2)將所述受體微球標(biāo)記抗體、生物素按照質(zhì)量比為20：1的方式加入0.01M PH7.4的PBS緩沖液中，于25℃旋轉(zhuǎn)孵育2h；將孵育好的抗體生物素溶液用0.01M PH7.4的PBS緩沖液在2-8℃下透析4h，重復(fù)透析3次，最終將生物素化抗體復(fù)合物保存至2-8℃?zhèn)溆茫锼乜贵w復(fù)合物終濃度為0.4mg/mL。

7.如權(quán)利要求1所述的cTnI檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑保存緩沖液用于保存所述受體微球-抗體復(fù)合物、供體微球-親和素復(fù)合物、生物素化抗體復(fù)合物。