[發明專利]一種酶催化制備茶黃素的方法及其制得的產品

在審

• 申請號: 202011321646.1
• 申請日: 2020-11-23
• 公開（公告）號: CN112553265A
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發明（設計）人: 楊衛國;趙凡偉;閔小華;金鐘;周廣勇;管華揚
• 申請（專利權）人: 南通德諾生物技術有限公司
• 主分類號: C12P17/16
• 分類號: C12P17/16;C07D311/62
• 代理公司: 北京匯信合知識產權代理有限公司 11335
• 代理人: 林聰源

本發明公開了一種酶催化制備茶黃素的方法及其制得的產品，所述方法包括：步驟S1：將鮮茶葉粉碎，并加入石油醚或乙酸乙酯攪拌均勻，獲得混合物；步驟S2：將混合物中的石油醚或乙酸乙酯濾除，獲得葉粉；步驟S3：在所述葉粉中，加入茶多酚制品和水，加入乙酸乙酯或乙酸丁酯，獲得混合體系；步驟S4：將所述混合體系進行有氧發酵；步驟S5：取發酵液，并進行干燥，獲得茶黃素固形物。在鮮茶葉粉加入石油醚或乙酸乙酯脫除咖啡因、茶堿蠟質、葉綠素及非揮發性油脂，以制備含有多酚氧化酶酶系的葉粉，以葉粉為固定化酶催化劑，催化茶多酚制品發酵，制備茶黃素；葉粉中保留了天然固化多酚氧化酶酶系，對酶活性的影響小。

技術領域

本發明涉及茶葉加工技術領域，具體涉及一種酶催化制備茶黃素的方法 及其制得的產品。

背景技術

茶黃素是紅茶中的主要活性成分，具有消炎、抑菌、抑制病毒、降血脂、 減肥、防治骨關節炎癥、預防癌癥等多種優秀的藥理和保健功效。由于茶黃 素在紅茶中的含量極低，成品紅茶中含量僅有0.5％-2％，且提取和純化較為困 難，成本高昂，故被譽為“茶黃金”。

系列研究結果表明，茶黃素類不僅是一種有效的自由基清除劑和抗氧化 劑，而且具有抗癌、抗突變、抗菌、抗病毒、改善和治療心腦血管疾病和治 療糖尿病等多種生理功能。因此，關于茶黃素的量產化制取及其生物學活性 的進一步研究，是當前茶黃素的研究中的一個重要課題。

酶促氧化發酵技術目前逐漸在國內量產，技術線路主要為：從天然原料 如鮮茶葉、果蔬汁、極細枝孢霉代謝物提取多酚氧化酶(PPO)，再經過適當 的富集、純化及固定化后，有氧發酵底物茶多酚生成茶黃素。

公開號為CN101541184A的PCT中國專利介紹了一種富含茶黃素的茶葉產 品的生產方法：將第一材料和第二材料接觸，以形成具有特定兒茶素比例和 茶黃素比例的混合物，低溫充氧條件下發酵該混合物并補加第二材料，發酵 完成后，從反應混合物中回收并干燥得到含高比例茶黃素的葉茶產物。通過 特定兒茶素比例和茶黃素比例的混合物，低溫充氧條件下發酵。

授權公告號為CN1289492C的中國專利介紹了一種茶黃素的提取方法：將 鮮茶葉揉捻后加水磨漿，然后發酵氧化得到含有茶黃素溶液，溶液再經離心 過濾、陶瓷膜過濾、溶劑萃取或用膜分離法得到茶黃素。

授權公告號為CN102648728B的中國專利提供了一種高茶黃素速溶紅茶的 外源酶法生產工藝：茶葉經熱水提取離心除雜后，加入梨勻漿液作為外源性 酶，微酸控溫鼓氧攪拌發酵，發酵液固液分離后經陶瓷膜過濾，有機膜濃縮 后干燥，得到茶黃素含量3％-4％的速溶紅茶粉。但是該外源酶法發酵的茶黃素 含量較低。

授權公告號為CN101886097B的中國專利提供了一種高純度茶黃素的制備 工藝：將綠茶經乙酸乙酯提取后，進行茶多酚底物組成和濃度的調整，然后 加入新鮮茶葉制成的酶，微酸控溫鼓氧攪拌發酵，分離發酵液，經濃縮、水 洗、轉溶、柱層析樹脂精制、濃縮、干燥得到高純度茶黃素。制得的茶黃素 可用于制備抗流感病毒藥物。該工藝在轉溶時會大量析出由葉綠素咖啡因茶 多酚茶黃素共聚產生的墨綠色焦膠，嚴重影響產品收率和品質。

授權公告號為CN101565724B的中國專利介紹了一種極細枝孢霉生物合成 茶黃素粗提物的方法：通過對大量微生物的篩選，獲得了高產多酚氧化酶(PPO) 的菌株極細枝孢霉，在優化的發酵條件下以培養基培養該菌株生成多酚氧化 酶，再以此粗酶液通入氧氣體外模擬氧化兒茶素制備茶黃素，再經膜過濾及 干燥制得茶黃素粗提取，粗制品中茶黃素含量大于20％。

公開號為CN106957884A的中國專利公開了一種富含兒茶素的茶黃素產品： 將充分研磨的茶樹嫩莖及鮮葉，與一定比例特定組成的水飽和乙酸乙酯和石 油醚混合，水浴振蕩酶促反應，過濾反應液濃縮干燥，再溶解過濾制得富含 兒茶素的茶黃素產品。