[發明專利]多樣性抗體產生細胞的細胞庫及其用途

在審

• 申請號: 202011321145.3
• 申請日: 2020-11-23
• 公開（公告）號: CN114525591A
• 公開（公告）日: 2022-05-24
• 發明（設計）人: 汪曉靜
• 申請（專利權）人: 祥德生物醫藥(上海)有限公司
• 主分類號: C40B40/02
• 分類號: C40B40/02;C12N5/10;C12N15/85;C12N15/55;C12N15/13;C12P21/00
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陶啟長;韋東

1.一種多樣型抗體產生細胞的細胞庫，所述細胞庫中的抗體產生細胞的抗體基因包含多種抗體重鏈可變區的編碼序列。

2.如權利要求1所述的細胞庫，其特征在于，所述抗體重鏈可變區包含來自不同供體細胞的抗體重鏈可變區基因的重鏈V區段、重鏈D區段、或重鏈J區段，或其任意組合。

3.如權利要求1或2所述的細胞庫，其特征在于，

所述細胞庫中的抗體產生細胞的抗體基因包含多種重鏈V區段，優選地，所述重鏈V區段選自Gene ID:3492中的任何一個或多個重鏈V區段，和/或

所述細胞庫中的抗體產生細胞的抗體基因包含多種重鏈D區段，優選地，所述重鏈D區段選自Gene ID:3492中的任何一個或多個重鏈D區段，和/或

所述細胞庫中的抗體產生細胞的抗體基因包含多種重鏈J區段，優選地，所述重鏈J區段選自Gene ID:3492中的任何一個或多個重鏈J區段，

更優選地，所述抗體重鏈可變區選自Gene ID:3492所示抗體重鏈基因座中所列的任意重鏈可變區。

4.如權利要求1或2所述的細胞庫，其特征在于，所述抗體產生細胞是分離的哺乳動物抗體產生細胞，

優選地，所述分離的哺乳動物抗體產生細胞是人源B細胞系細胞。

5.如權利要求1或2所述的細胞庫，其特征在于，所述抗體產生細胞的抗體基因的重鏈可變區編碼序列的體細胞超突變增加，優選地，所述抗體產生細胞經工程改造使得Spt5的表達降低，和/或所述抗體產生細胞表達HIV Tat蛋白或其具有轉錄因子結合功能的片段，和/或所述抗體產生細胞表達激活誘導脫氨酶或其具有激活誘導脫氨功能的片段。

6.一種擴展抗體產生細胞的細胞庫多樣性的方法或制備多樣型抗體產生細胞的細胞庫的方法，包括

(1a)通過基因改造在細胞庫的抗體產生細胞中引入多種抗體重鏈可變區的編碼序列，或

(1b)通過基因改造在細胞庫的抗體產生細胞中引入多種重鏈可變區編碼序列的區段，優選地，多種重鏈可變區編碼序列的區段選自以下的一項或多項：多種重鏈V區段、多種重鏈D區段和多種重鏈J區段，和

(2)使抗體產生細胞與增加抗體基因座體細胞超突變的試劑接觸，和

任選的(3)通過基因改造在抗體產生細胞中引入多種抗體重鏈恒定區、多種抗體輕鏈可變區和/或多種抗體輕鏈恒定區的編碼序列。

7.一種體外進化篩選細胞的方法，所述細胞生產具有抗原特異性活性的抗體，所述方法包括

(1a)通過基因改造在細胞庫的抗體產生細胞中引入多種抗體重鏈可變區的編碼序列，或

(1b)通過基因改造在細胞庫的抗體產生細胞中引入多種重鏈可變區編碼序列的區段，優選地，多種重鏈可變區編碼序列的區段選自以下的一項或多項：多種重鏈V區段、多種重鏈D區段和多種重鏈J區段，和

(2)使抗體產生細胞與增加抗體基因座體細胞超突變的試劑接觸，和

任選的(3)通過基因改造在抗體產生細胞中引入多種抗體重鏈恒定區、多種抗體輕鏈可變區和/或多種抗體輕鏈恒定區的編碼序列，

(4)在使細胞生產抗體的條件下培養多樣型抗體產生細胞的細胞庫，

(5)根據抗體的抗原特異性活性選擇生產抗體的細胞，所述選擇優選利用包含細胞克隆篩選技術、流式細胞儀或光電微流控技術的方法。