[發明專利]一種提高透明質酸產量的方法及菌株

有效

• 申請號: 202011317594.0
• 申請日: 2020-11-23
• 公開（公告）號: CN112592930B
• 公開（公告）日: 2023-03-10
• 發明（設計）人: 劉浩;高偉霞;張曉亮;張廣通
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C12N15/74
• 分類號: C12N15/74;C12N1/21;C12P19/26;C12R1/46
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 韓曉梅

本發明涉及一種提高透明質酸產量的方法與菌株，將glnA基因插入pSET4S::repA::Ppgk(pLH275)載體的多克隆位點處，構建成功pSET4S::repA::Ppgk::GlnA(pLH860)；轉入獸疫鏈球菌ATCC 39920，獲得的菌株glnA/OP的HA產量明顯高于初始菌株。以菌株glnA/OP進行透明質酸的發酵罐發酵生產，10h時其透明質酸的產量比野生型提高了70％，發酵進行到16h時比野生型提高了21％，最終發酵24h時，工程菌glnA/OP HA產量為3.55g/L，較野生型提高了7.2％。為提升透明質酸產量提供了新方法，并獲得一株高產透明質酸的菌株。

技術領域

本發明屬于基因工程技術領域，尤其是一種用于提高量透明質酸產量的方法及菌株。

背景技術

透明質酸(hyaluronic acid，HA)因具有的保濕性、生物相容性以及非免疫性，在化妝品、臨床醫學和保健品等方面極具商業價值。在化妝品行業，HA作為一種性質優良的化妝品添加劑，越來越受到國內外化妝品行業的重視，在化妝品中的應用前景非常可觀。在臨床醫學方面，HA廣泛分布于軟結締組織細胞的外基質中，因其具有良好的生物降解性和生物相容性，在臨床醫學中已被廣泛應用。在保健食品中，服用含有HA的保健品，可以增加人體中HA合成的前體物，提高人體中HA的含量，保護關節，增加皮膚彈性，抗衰老。

目前，微生物發酵法是HA生產的主要方法之一。但是當前微生物發酵合成HA的生產依然存在很多問題，例如HA合成的限速步驟尚不清楚，提高HA產量的代謝通路改造目標較少；HA的產量達到4-5g/L后，培養基的粘度高達400-500mPas，會嚴重影響溶氧和傳質，從而限制HA的產量；HA合成會與菌體生長競爭前體物質，UDP-N-乙酰葡萄糖胺和UDP-葡萄糖醛酸等。

通過檢索，尚未發現與本發明專利申請相關的專利公開文獻。

發明內容

本發明目的在于克服現有技術中市場對HA的巨大需求，而現有提高HA產量的菌株改造方法較少、產量提高難度較大的問題，提供一種用于提高HA產量的方法與菌株，豐富了提高HA產量的方法。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：

一種用于提高透明質酸產量的遺傳重組質粒，所述遺傳重組質粒是將glnA基因插入基因表達載體pSET4S::repA::Ppgk即pLH275的多克隆位點處，構建成功pSET4S::repA::Ppgk::GlnA即pLH860；

其中，所述基因表達載體pSET4S::repA::Ppgk的核苷酸序列為SEQ ID NO.2。

而且，所述glnA基因的長度為1382bp，其核苷酸序列為SEQ ID NO.1，該glnA基因始于起始密碼子ATG上游15bp，結束于終止密碼子TAA下游20bp。

而且，所述glnA基因來源于獸疫鏈球菌(Streptococcus zooepidemicus)ATCC39920基因組。

一種含有如上所述的用于提高透明質酸產量的遺傳重組質粒的工程菌。

而且，所述工程菌的構建方法為：

將用于提高透明質酸產量的遺傳重組質粒轉入宿主菌，構建工程菌；其中，所述宿主菌為獸疫鏈球菌(Streptococcus zooepidemicus)ATCC39920。

而且，所述轉入為電轉入。

一種利用如上所述的工程菌在提高透明質酸產量方面中的應用。

而且，所述應用為在以蔗糖為底物發酵生產透明質酸方面的應用。

一種利用如上所述的菌株高產透明質酸的方法，使用所述工程菌發酵獲得。