[發明專利]IV膠原蛋白檢測試劑盒

在審

• 申請號: 202011314642.0
• 申請日: 2020-11-20
• 公開（公告）號: CN112505331A
• 公開（公告）日: 2021-03-16
• 發明（設計）人: 沃燕波;宋士強;劉會永
• 申請（專利權）人: 阿里生物技術泰州有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/543
• 代理公司: 南京常青藤知識產權代理有限公司 32286
• 代理人: 黃胡生

本發明提供一種IV型膠原蛋白檢測試劑，包括試劑1和試劑2，試劑1組成包含：2?(N?嗎啉)乙磺酸緩沖液：80?200mM；氯化鈉：20?40g/L；氯化鎂：20?40g/L；氯化鈣：20?40g/L；辛醇硫酸鈉：1?4g/L；氨基丁三醇硫酸十二酯：1?4g/L；疊氮化鈉：0.1g/L；溶劑為純化水，試劑1的PH為5.5～6；試劑2組成包含：三(羥甲基)氨基甲烷緩沖液：50?200mM；羊抗人IV型膠原蛋白抗體包被膠乳顆粒：1?3％；二辛基磺化琥珀酸鈉：1?4g/L；月桂酰胺丙基羥磺基甜菜堿：1?4g/L；疊氮化鈉：0.1g/L；溶劑為純化水，試劑2的PH為7.5。本發明試劑檢測靈敏度高，線性好，穩定性好,能有效抑制類風濕因子干擾。

技術領域

本發明涉及分析檢測技術領域，具體涉及一種IV膠原蛋白檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

四型膠原蛋白(IVC)屬于非原纖維膠原蛋白，是基底膜網狀結構的主要成分之一。作為肝細胞基底膜的核心結構，其在肝纖維化形成過程中起主要作用。IVC在肝纖維化時會產生顯著變化，在輕度肝損傷合并肝纖維化時，在體內膠原總量增加尚不明顯的情況下，血清IVC含量即可顯著增加。因此，其含量的變化能較好的反應肝纖維化、肝細胞損傷及程度，是檢測肝臟組織病變如肝纖維化的重要指標之一。

目前市場上IVC檢測常用的方法有如下幾種：酶聯免疫檢測法(ELISA)、放射免疫分析法、時間分辨熒光免疫分析方法、膠乳免疫比濁法、化學發光法等。其中ELISA需要特定設備，耗時；放射免疫分析技術法需要搭配昂貴的設備，存在放射線輻射和污染等問題；時間分辨熒光免疫分析方法需要用稀有金屬進行標記；化學發光法需要特定設備，且僅能一次發光且易受環境干擾；膠乳免疫比濁法屬于普通免疫比濁技術的衍生技術，克服了普通免疫比濁技術信號量非常有限的缺點，使抗體體積有了數量級上的增長，大幅提升了可檢測性，但該方法也存在不少不足之處，如易受到存在于測試樣品中的嗜異性抗體的干擾，尤其是類風濕因子的干擾，從而導致假陽性結果；此外，膠乳微球的粒徑大小對試劑的測試性能也會產生較大影響，粒徑過大，由于微球表面積跟自身體積比率小，易造成單位體積內抗體包被量小，導致抗原過剩，無法對濃度高的分析物進行檢測，粒徑過小則膠乳表面積跟自身體積比率大，不易產生凝集現象，導致吸光度變化緩慢，試劑的檢測靈敏度降低。

發明內容

針對上述不足，本發明的目的是提供一種檢測靈敏度高，線性范圍廣，穩定性好，能有效抑制類風濕因子干擾的膠乳免疫比濁法IVC檢測試劑及其制備方法。

本發明所采用的技術方案為：

一種IV膠原蛋白檢測試劑盒，包括試劑1和試劑2；

試劑1的組分和濃度如下：

2-(N-嗎啉)乙磺酸緩沖液：80-200mM

氯化鈉：20-40g/L

氯化鎂：20-40g/L

氯化鈣：20-40g/L

辛醇硫酸鈉：1-4g/L

氨基丁三醇硫酸十二酯：1-4g/L

疊氮化鈉：0.1g/L

溶劑為純化水，試劑1的PH為5.5～6；

試劑2的組分和濃度如下：

三(羥甲基)氨基甲烷緩沖液：50-200mM

羊抗人IV型膠原蛋白抗體包被膠乳顆粒：1-3％

二辛基磺化琥珀酸鈉：1-4g/L

月桂酰胺丙基羥磺基甜菜堿：1-4g/L

疊氮化鈉：0.1g/L

溶劑為純化水，試劑2的PH為7.5