[發明專利]一種循環神經細胞檢測試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 202011309903.X
• 申請日: 2020-11-20
• 公開（公告）號: CN112462058A
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發明（設計）人: 丁顯廷;張瑜
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543;G01N21/64
• 代理公司: 上海旭誠知識產權代理有限公司 31220
• 代理人: 鄭立

本發明屬于醫學生物技術研究領域，本發明第一方面，公開了含有熒光標記的神經元特異性抗體，熒光標記的白細胞經典標志物抗體和細胞核熒光染料的循環神經細胞檢測試劑盒，本發明第二方面，公開了一種用于檢測循環神經細胞的密度梯度離心試劑盒及其檢測方法，本發明第三方面，公開了一種用于檢測循環神經細胞的免疫磁珠試劑盒及其檢測方法。與目前常規的檢測手段相比，本發明公開的技術方案具有特異性高，檢測取樣簡單，檢測成本價格更低，同時可以實現血液樣本實時監測的技術效果。

技術領域

本發明屬于醫學生物技術研究領域，涉及一種循環神經細胞檢測試劑盒及檢測方法。

背景技術

近年來，我國腦卒中發病年齡年輕化的趨勢明顯，這將對社會經濟發展產生嚴重影響。已有研究表明，腦卒中與多種疾病有著密切關系，例如糖尿病、高血壓和心臟病，甚至與遺傳因素有關。由于腦卒中的發病因素的異質性非常高，如何對腦卒中進行方便、快捷、準確的診斷，對于腦卒中的預防、預后監測有著重要意義。目前主要基于臨床診斷和神經影像學診斷對缺血性腦卒中進行診斷，這在很大程度上取決于局部可用性，并且在缺血性腦卒中發生的早期階段很難檢測到。

但是目前常用的診斷和影像學診斷技術均存在著缺點。計算機斷層掃描技術、非對比計算機斷層掃描、計算機體層攝影血管造影和磁共振成像等不能區別急性和慢性缺血性腦卒中，很難檢測出慢性出血，包括微出血，評估蛛網膜下腔和腦內出血的能力不足，成像過程中所使用的造影劑具有相應的腎臟毒性，同時檢測費用比較貴。基于液體活檢的生物標志物，主要是來源于外周血、血漿、血清、腦脊液中的分子層面的生物標志物，主要包括發生腦卒中等中樞神經系統疾病后神經細胞所釋放的蛋白等。主要有S100B蛋白、MMP-9蛋白、白介素6、粘附分子等。這些蛋白層面的生物標志物在循環系統中需要經過一定的潛伏期才能被檢測到。例如S100B的釋放延遲及缺乏對腦卒檢測的特異性，所以在臨床使用中受到限制。另外檢測時間是腦卒中診斷中最關鍵的因素之一。盡管微陣列可以提供數千種基因的高通量篩選，但需要約11小時才能進行分析。另外，需要特殊的儀器并且有經驗的人員來執行分析，這不利于臨床上的即時檢驗。針對于缺血性腦卒中等的中樞神經系統疾病的研究都集中在蛋白質和核糖核酸層面。蛋白質和核糖核酸是在缺血性腦損傷后從神經細胞釋放出來并穿過血腦屏障進入外周血的。血腦屏障的損傷和腦水腫形成是急性和慢性腦缺血神經功能障礙發生和發展的重要因素。缺血性腦卒中的明確的生物標志物將顯著促進卒中的預測，尤其是早卒中發生的早期階段，并對神經影像分析提供一定的補充作用。

針對缺血性腦卒中，大多數生物標志物的研究都集中在蛋白質和核糖核酸上，這些蛋白質和核糖核酸是在缺血性腦損傷后從神經細胞釋放出來并穿過血腦屏障進入外周血的。血腦屏障是一個動態網絡，可調節循環系統與腦實質之間的物質交換，同時還能維持中樞神經系統的體內平衡。血腦屏障的損傷和腦水腫形成是急性和慢性腦缺血神經功能障礙發生和發展的重要因素。缺血性腦卒中的明確的生物標志物將顯著促進卒中的預測，尤其是腦卒中發生的早期階段，并對神經影像分析提供一定的補充作用。因此，急性缺血性腦卒中急需可以準確預測其發生及復發的生物標志物。循環細胞，由相應的器官釋放進入到循環系統中，其產生的分子生物標志物(蛋白、微小RNA和游離核酸)可以揭示健康與疾病的關鍵信息。

但是，目前學者們尚未確定在細胞水平上可以準確描述缺血性腦卒中發生和發展的特定生物標志物，如何通過循環神經細胞的特點生物標志物來揭示健康與疾病的關鍵信息。因此，本領域技術人員致力于研發一種循環神經細胞檢測試劑盒及檢測方法。

發明內容

為了檢測神經系統中的循環神經細胞，通過檢測其產生的分子生物標志物，來尋找和確定循環神經細胞，本申請第一方面公開了一種循環神經細胞檢測試劑盒，檢測試劑盒包括：CTC富集的CD36抗體，2％FBS的HBSS緩沖液，密度梯度離心液，紅細胞裂解液，細胞破膜封閉液，熒光標記的神經元特異性抗體，熒光標記的白細胞經典標志物抗體，細胞核熒光染料，微孔陣列芯片，包含循環神經細胞標志物的標準品和包含陽性對照和陰性對照的質控品。