[發明專利]一種基于microRNA的早期肝纖維化診斷標志物及試劑盒

在審

• 申請號: 202011309502.4
• 申請日: 2020-11-20
• 公開（公告）號: CN112921079A
• 公開（公告）日: 2021-06-08
• 發明（設計）人: 程錦霖
• 申請（專利權）人: 諸暨瑞健生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 周瓊

本發明公開了一種基于microRNA的早期肝纖維化診斷標志物及試劑盒，包括編碼以下microRNA分子組合的核酸分子：Has?miR?122；Has?miR?151?3p。進一步的，所述microRNA在PNALT肝纖維化患者血漿中的水平高于健康人、PNALT無肝纖維化者。進一步的，所述血漿microRNA組成的PNALT肝纖維化診斷組合的得出方法包括以下步驟：步驟一：高通量測序；步驟二：實時定量熒光PCR驗證；步驟三：在健康人、PNALT無肝纖維化、PNALT有肝纖維化患者組成的訓練組中確立可區分肝纖維化與非纖維化的血漿microRNA組合；步驟四：在兩個獨立驗證組驗證步驟三確立的血漿microRNA組合診斷肝纖維化的效果。本發明實現較為全面客觀地反映循環microRNA的情況，增加多中心驗證，提高對照設置的完善程度，便于說明確定的標志物為早期肝纖維化特異的診斷標志物。

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，尤其涉及一種基于microRNA的早期肝纖維化診斷標志物及試劑盒。

背景技術

全世界約有3.5-4億人口為乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV) 感染者，而中國的慢性乙型肝炎病毒(Chronic Hepatitis B Virus,CHB)患者已達1.2億，HBV相關性肝病的發病進程一般呈現：“HBV持續感染→肝纖維化→肝硬化→肝細胞肝癌”幾個階段，其中肝纖維化是唯一的可逆階段，有效的抗病毒治療可以延緩肝硬化、肝癌的發生甚至達到纖維化的逆轉，因此準確診斷肝臟纖維化的不同階段對CHB感染者進行干預治療至關重要，是目前亟待解決的重大健康問題

肝纖維化是一個病理生理過程，是指由各種致病因子所致肝內結締組織異常增生，任何肝臟損傷在肝臟修復愈合的過程中都有肝纖維化的過程，如果損傷因素長期不能去除，纖維化的過程長期持續就會發展成肝硬化；纖維化發生是預測慢性肝臟損傷和疾病進展的重要因素，檢測肝纖維化的早期發生非常重要，肝纖維化的臨床診斷方法包括兩大類，一類是有創檢查，即肝穿刺活組織檢查；另一類是無創檢查，包括血清分子標志物和影像學檢查。

目前，已應用于臨床的生化檢測指標以及影像學檢查不能全部檢測及反應出這部分人群的肝臟受損狀態及早期纖維化程度，因此容易發生漏診的情況；肝臟穿刺雖然現階段被認定為檢查肝臟損傷及纖維化程度的金標準，但其為有創檢查，患者的依從性較差，而且由于穿刺標本較小(取材的局限性) 以及病理醫生診斷的經驗，難以保證檢查結果的準確性。

血液等體液標本易于獲得，臨床可操作性強且創傷性小，而且循環 microRNA穩定性好，檢測便利，因此循環microRNA具有作為疾病無創性生物標志物的潛能，適用于慢乙肝攜帶者的篩查。然而目前關于循環microRNA作為肝纖維化診斷標志物的研究仍存在不足：大部分研究只是挑選前任報道的在肝纖維化組織表達失調的循環microRNA作為候選指標，可能無法全面客觀反映循環microRNA的情況；(2)部分研究樣本少，缺乏多中心驗證；(3)對照設置不完善，難以說明確定的標志物為早期肝纖維化特異的診斷標志物。

綜上所述，需要一種基于microRNA的早期肝纖維化診斷標志物及試劑盒來解決現有技術中所存在的不足之處。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明提供了一種基于microRNA的早期肝纖維化診斷標志物及試劑盒，旨在解決可能無法全面客觀反映循環microRNA的情況，部分研究樣本少，難以說明確定的標志物為早期肝纖維化特異的診斷標志物的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種基于microRNA的早期肝纖維化診斷標志物，包括編碼以下microRNA分子組合的核酸分子：

Has-miR-122；

Has-miR-151-3p。

進一步的，所述microRNA在PNALT肝纖維化患者血漿中的水平高于健康人、PNALT無肝纖維化者。