[發(fā)明專利]一種金葡特異性納米抗體及其雙抗夾心ELISA方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202011309007.3 | 申請日： | 2020-11-20 |
| 公開（公告）號： | CN112500482B | 公開（公告）日： | 2023-01-13 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 王碩;胡耀中;孫穎 | 申請（專利權(quán)）人： | 南開大學(xué) |
| 主分類號： | C07K16/12 | 分類號： | C07K16/12;C07K14/31;C07K1/14;G01N33/569;A61K39/40;A61P31/04 |
| 代理公司： | 天津合正知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12229 | 代理人： | 邢月;張艷梅 |
| 地址： | 300071*** | 國省代碼： | 天津;12 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 特異性 納米 抗體 及其 夾心 elisa 方法 | ||
1.一種金黃色葡萄球菌特異性納米抗體，其特征在于：所述的特異性納米抗體為納米抗體Nb85、納米抗體Nb119、納米抗體Nb147或納米抗體Nb174中的至少一種；
所述的特異性納米抗體包括4個框架區(qū)FR1、FR2、FR3、FR4和3個互補(bǔ)決定區(qū)CDR1、CDR2、CDR3；
對于納米抗體Nb85：FR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的FR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述的FR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述的FR4的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示，所述的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示；
對于納米抗體Nb119：FR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示，所述的FR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示，所述的FR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示，所述的FR4的氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示，所述的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示，所述的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示，所述的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示；
對于納米抗體Nb147：FR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示，所述的FR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.16所示，所述的FR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.17所示，所述的FR4的氨基酸序列如SEQ ID NO.18所示，所述的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.19所示，所述的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.20所示，所述的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.21所示；
對于納米抗體Nb174：FR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.22所示，所述的FR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.23所示，所述的FR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.24所示，所述的FR4的氨基酸序列如SEQ ID NO.25所示，所述的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.26所示，所述的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.27所示，所述的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.28所示；
所述的特異性納米抗體的4個框架區(qū)和3個互補(bǔ)決定區(qū)的排列順序?yàn)镕R1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金黃色葡萄球菌特異性納米抗體，其特征在于：所述的納米抗體Nb85的VHH的氨基酸序列如SEQ ID NO.29所示；所述的納米抗體Nb119的VHH的氨基酸序列如SEQ ID NO.30所示；所述的納米抗體Nb147的VHH的氨基酸序列如SEQ ID NO.31所示；所述的納米抗體Nb174的VHH的氨基酸序列如SEQ ID NO.32所示。
3.權(quán)利要求1或2所述的金黃色葡萄球菌特異性納米抗體的應(yīng)用，其特征在于：所述的特異性納米抗體在金黃色葡萄球菌表面抗原鑒定中的應(yīng)用。
4.權(quán)利要求1或2所述的金黃色葡萄球菌特異性納米抗體的應(yīng)用，其特征在于：所述的特異性納米抗體在基于抗體的金黃色葡萄球菌表面抗原的純化和示蹤中的應(yīng)用。
5.權(quán)利要求1或2所述的金黃色葡萄球菌特異性納米抗體的應(yīng)用，其特征在于：所述的特異性納米抗體在制備金黃色葡萄球菌感染的診斷試劑中的應(yīng)用。
6.一種使用權(quán)利要求1或2所述的特異性納米抗體的金黃色葡萄球菌的雙抗夾心ELISA方法，其特征在于：
使用權(quán)利要求1或2所述的特異性納米抗體制備帶有His標(biāo)簽的納米抗體和生物素化的納米抗體，將帶有His標(biāo)簽的納米抗體作為捕獲抗體，生物素化的納米抗體作為檢測抗體，在捕獲抗體中加入金黃色葡萄球菌，使其與所述的捕獲抗體結(jié)合，然后加入所述的檢測抗體，與HRP偶聯(lián)的鏈霉素親和素孵育后進(jìn)行顯色后即成；所述的雙抗夾心ELISA方法用于非診斷目的檢測。
7.權(quán)利要求6所述的金黃色葡萄球菌的雙抗夾心ELISA方法的應(yīng)用，其特征在于：所述的方法在制備檢測試劑盒中的應(yīng)用。
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