[發明專利]一種金葡特異性納米抗體及其雙抗夾心ELISA方法

有效

• 申請號: 202011309007.3
• 申請日: 2020-11-20
• 公開（公告）號: CN112500482B
• 公開（公告）日: 2023-01-13
• 發明（設計）人: 王碩;胡耀中;孫穎
• 申請（專利權）人: 南開大學
• 主分類號: C07K16/12
• 分類號: C07K16/12;C07K14/31;C07K1/14;G01N33/569;A61K39/40;A61P31/04
• 代理公司: 天津合正知識產權代理有限公司 12229
• 代理人: 邢月;張艷梅

本發明提供了一種金葡特異性納米抗體及其雙抗夾心ELISA方法，所述的特異性納米抗體為納米抗體Nb85、納米抗體Nb119、納米抗體Nb147或納米抗體Nb174中的至少一種。本發明所述的金黃色葡萄球菌特異性納米抗體可以有效避免傳統抗體應用于檢測中的假陽性，可用于食品中金黃色葡萄球菌的靶向和高靈敏檢測體系構建。

技術領域

本發明屬于免疫檢測領域，尤其是涉及金葡特異性納米抗體及其 雙抗夾心ELISA方法。

背景技術

金黃色葡萄球菌是引起人類食源性疾病的一種重要病原菌，被金 黃色葡萄球菌腸毒素污染的食品能引起人體惡心、嘔吐、腹瀉等癥狀。 傳統的金黃色葡萄球菌的檢測技術主要依賴于常規的微生物學檢測 方法，步驟繁瑣、耗時較長。一些免疫檢測技術開發基于單克隆或多 克隆抗體的篩選與制備，篩選和制備抗體周期較長，且檢測結果會有 假陽性。在駝源動物外周血液中天然存在一種重鏈抗體(Heavy Chain only Antibodies,HCAbs)，與傳統單克隆抗體相比，重鏈抗體天然 缺失輕鏈及重鏈第一恒定區(CH1)。克隆并表達重鏈抗體的重鏈可 變區得到重鏈抗體的抗原識別和結合域，稱為納米抗體(Nanobody, Nb)。納米抗體具有與原重鏈抗體相當的結構穩定性及抗原結合活性， 是目前已知的可結合靶向抗原的最小抗體單位。傳統針對金黃色葡萄 球菌的檢測多針對其毒素檢出，而針對金黃色葡萄球菌菌株的免疫檢 測多引傳統抗體的非特異性結合而不能應用，并且針對傳統抗體的制 備時間長、假陽性高，與傳統單克隆抗體片段相比，納米抗體制備周 期短，成本低，穩定性高，并且其單結構域特性能避免與金黃色葡萄 球菌表面蛋白的非特異性結合，因此能用于金葡的免疫檢測技術開發 和方法建立。目前，納米抗體被廣泛應用于開發治療性抗體藥物、診 斷試劑(膠體金法、酶聯免疫吸附法、電化學發光法)、親和純化基 質、免疫學研究等基礎科學研究領域。

發明內容

有鑒于此，本發明旨在克服現有技術中的缺陷，提出一種金葡特 異性納米抗體及其雙抗夾心ELISA方法。

為達到上述目的，本發明的技術方案是這樣實現的：

一種金葡特異性納米抗體，所述的特異性納米抗體為納米抗體 Nb85、納米抗體Nb119、納米抗體Nb147或納米抗體Nb174中的至少 一種。

進一步，所述的特異性納米抗體包括4個框架區FR1、FR2、FR3、 FR4和3個互補決定區CDR1、CDR2、CDR3；

對于納米抗體Nb85：FR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所 述的FR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述的FR3的氨基酸序 列如SEQ ID NO.3所示，所述的FR4的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所 示，所述的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示，所述的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示；

對于納米抗體Nb119：FR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示， 所述的FR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示，所述的FR3的氨基酸 序列如SEQ ID NO.10所示，所述的FR4的氨基酸序列如SEQ ID NO.11 所示，所述的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示，所述的CDR2 的氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示，所述的CDR3的氨基酸序列如 SEQ ID NO.14所示；

對于納米抗體Nb147：FR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示， 所述的FR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.16所示，所述的FR3的氨基 酸序列如SEQ ID NO.17所示，所述的FR4的氨基酸序列如SEQ ID NO.18 所示，所述的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.19所示，所述的CDR2 的氨基酸序列如SEQ ID NO.20所示，所述的CDR3的氨基酸序列如 SEQ ID NO.21所示；