[發明專利]一種用于檢測DNA的免疫層析試紙條及其制備方法在審

申請號：	202011308564.3	申請日：	2020-11-20
公開（公告）號：	CN112522368A	公開（公告）日：	2021-03-19
發明（設計）人：	劉國東;余慶才;張靜;邱萬偉;錢立生;李坤;張學記	申請（專利權）人：	安徽科技學院
主分類號：	C12Q1/6804	分類號：	C12Q1/6804
代理公司：	北京高沃律師事務所 11569	代理人：	瞿曉晶
地址：	233100 ***	國省代碼：	安徽;34
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種用于檢測 dna 免疫層析試紙及其制備方法
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【說明書】：

本發明提供了一種用于檢測DNA的免疫層析試紙條，屬于免疫層析檢測技術領域；所述免疫層析試紙條的結合墊上噴涂有檢測探針與金納米棒的偶聯物；所述檢測探針為5’端巰基修飾的單鏈DNA；所述檢測探針與待檢測DNA的核苷酸序列互補配對。本發明中，金納米棒(AuNRs)具有可調諧和更強的可見/近紅外吸收、更高的表面增強拉曼散射截面、單向等離子體傳播的可能性以及增強的光致發光。本發明基于AuNRs的免疫層析試紙條能夠在短時間內對DNA進行靈敏和定量的視覺檢測。經過對比試驗，基于AuNRs的側向流動傳感器用肉眼能夠檢測到DNA最小濃度為10pM，比基于金納米顆粒(AuNPs)的低20倍。

技術領域

本發明涉及免疫層析檢測技術領域，尤其涉及一種用于檢測DNA的免疫層析試紙條及其制備方法。

背景技術

基因是遺傳的基本單元，攜帶有遺傳信息的DNA或RNA序列，通過復制，把遺傳信息傳遞給下一代，指導蛋白質的合成來表達自己所攜帶的遺傳信息，從而控制生物個體的性狀表達。基因檢測是通過血液、其他體液、或細胞對DNA進行檢測的技術。DNA檢測在基因治療、臨床診斷、各種生物醫學研究中都非常重要。檢測DNA最常用的技術是聚合酶鏈反應(PCR)。PCR具有很高的靈敏度和準確性，但由于需要訓練有素的人員、昂貴的儀器和相對清潔的環境，在待檢樣品濃度過小的情況下，PCR的效果不太好。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用于檢測DNA的免疫層析試紙條及其制備方法，本發明的免疫層析試紙條能夠檢測較低濃度待檢樣品，檢測靈敏度高。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種用于檢測DNA的免疫層析試紙條，包括底板和順次連接在底板上的樣品墊、結合墊、測試墊和吸收墊；

所述結合墊上噴涂有檢測探針與金納米棒的偶聯物；所述檢測探針為5’端巰基修飾的單鏈DNA；所述檢測探針與待檢測DNA的核苷酸序列互補配對；

所述檢測墊上設置有檢測線和質控線；所述檢測線上噴涂有捕獲探針與鏈霉親和素的偶聯物；所述捕獲探針的3’端經生物素標記；

所述質控線上噴涂有質控探針與鏈霉親和素的偶聯物；所述質控探針的3’端經生物素修飾；所述質控探針與待檢測DNA的核苷酸序列互補配對。

優選的，所述金納米棒的長度為20～200nm。

優選的，所述檢測探針與金納米棒的偶聯物的制備方法包括：

在金納米棒中依次加入dATP、十二烷基硫酸鈉水溶液、氯化鈉水溶液和檢測探針，進行偶聯反應，離心，收集沉淀，洗滌，重懸，得到含有檢測探針與金納米棒的偶聯物的溶液。

優選的，所述金納米棒、dATP、十二烷基硫酸鈉水溶液、氯化鈉水溶液和檢測探針的體積比為：500：5：7.5：25：85；所述dATP的濃度為1mM；所述十二烷基硫酸鈉水溶液的質量濃度為1％；所述氯化鈉水溶液的濃度為2M。

優選的，所述偶聯反應的反應程序包括：60℃水浴中孵育3h。