[發(fā)明專利]一種治療肝纖維化的siRNA及其遞送制劑

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011302953.5
• 申請(qǐng)日: 2020-11-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112522263A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-03-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 崔文浩;趙成江;王猛;鄭智;田歡棟
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 佑嘉(杭州)生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/113
• 分類號(hào): C12N15/113;A61K31/713;A61K9/08;A61K47/34;A61P1/16
• 代理公司: 石家莊德皓專利代理事務(wù)所(普通合伙) 13129
• 代理人: 劉磊娜

本發(fā)明涉及一種小干擾RNA，其通過(guò)NOX1 siRNA進(jìn)行RNA干擾（RNAi），可以有效靶向NOX1蛋白，抑制活性氧（ROS）的產(chǎn)生，有效抑制肝星狀細(xì)胞（HSC）的活化，進(jìn)而起到治療肝纖維化的作用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)藥制劑領(lǐng)域，具體涉及一種治療肝纖維化的siRNA及其遞送制劑。

背景技術(shù)

RNA干擾(RNA interference，縮寫(xiě)為RNAi)是指一種分子生物學(xué)上由雙鏈RNA誘發(fā)的基因沉默現(xiàn)象，其機(jī)制是通過(guò)阻礙特定基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯來(lái)抑制基因表達(dá)。當(dāng)細(xì)胞中導(dǎo)入與內(nèi)源性mRNA編碼區(qū)同源的雙鏈RNA時(shí)，該mRNA發(fā)生降解而導(dǎo)致基因表達(dá)沉默。長(zhǎng)度為20-25nt的siRNA(Small interfering RNA，小干擾核酸)能夠引發(fā)RNAi，可以特異性下調(diào)或關(guān)閉特定基因的表達(dá)，并具備的高效性、易合成及易操作的特點(diǎn)，所以該技術(shù)已被廣泛用于探索基因功能和傳染性疾病及惡性腫瘤的基因治療領(lǐng)域。

肝纖維化是肝損傷的結(jié)果，是各種致病因子所導(dǎo)致的肝內(nèi)結(jié)締組織異常增生，肝纖維化可能導(dǎo)致肝功能障礙，是肝損傷發(fā)展成其他慢性疾病的主要過(guò)程。其特征在于響應(yīng)于慢性損傷的炎癥細(xì)胞的募集和肝星形細(xì)胞(HSC)的活化，引起細(xì)胞外基質(zhì)的積聚。脂肪變性(steatosis)通常與肝炎和肝細(xì)胞損傷共存。不論其病因如何，增加的氧化應(yīng)激是在所有慢性肝病中引起纖維化的常見(jiàn)因素。受損的肝細(xì)胞、HSC和浸潤(rùn)的炎癥細(xì)胞是活性氧簇(ROS)的主要來(lái)源。實(shí)際上，氧化應(yīng)激將誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞的募集和HSC的活化。因此，在慢性肝損傷背景下，將會(huì)發(fā)生肝細(xì)胞損傷、ROS產(chǎn)生、HSC活化和炎癥細(xì)胞募集的惡性循環(huán)，從而放大對(duì)損傷的纖維化應(yīng)答。

近年來(lái)，抗肝纖維化藥物的研發(fā)及治療在肝纖維化的不同靶點(diǎn)、抑制肝星狀細(xì)胞活化與增殖、增強(qiáng)基質(zhì)金屬蛋白酶活性及抑制金屬蛋白酶組織抑制劑的活性、抑制炎癥反應(yīng)、調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的藥物，以及納米顆粒與抗纖維化藥物結(jié)合的治療和基因治療方面取得了顯著的進(jìn)展。但目前還沒(méi)有有效針對(duì)肝纖維化的治療方法。傳統(tǒng)藥物可能存在由于給藥劑量大等因素導(dǎo)致的不良反應(yīng)，而基因治療由于高效、靶向性強(qiáng)、易操作等特點(diǎn)成為未來(lái)抗肝纖維化不可或缺的研究方向。

活性氧(ROS)可以通過(guò)HSC中的氧化還原敏感蛋白激酶和轉(zhuǎn)錄因子來(lái)調(diào)節(jié)各種介體的激活和表達(dá)。NADPH氧化酶是吞噬細(xì)胞中ROS的主要來(lái)源，具有關(guān)鍵作用。NOX是NADPH氧化酶的催化亞基，NOX1是一種NOX的亞型，能夠產(chǎn)生ROS。在肝纖維化的形成過(guò)程中，各種致病因素持續(xù)作用于肝星狀細(xì)胞(HSC)，使其活化增殖、凋亡減少，進(jìn)而使膠原蛋白合成增加，細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)過(guò)度沉積。故若能有效抑制HSC的活化增殖，即可有效阻止肝纖維化的發(fā)生及進(jìn)一步發(fā)展。活性氧在肝纖維化形成過(guò)程中具有重要意義，其N(xiāo)ADPH氧化酶(NOX)主要通過(guò)活化HSC而發(fā)揮作用。有研究表明，在肝纖維化大鼠及肝硬化患者中NOX1表達(dá)增加，研究進(jìn)一步表明NOX1可能將成為一種新的肝纖維化的治療靶點(diǎn)(Lan,Kisseleva et al.2015)。肝星狀細(xì)胞(HSC)位于肝竇間隙，約占肝臟細(xì)胞總數(shù)的10％，一般藥物只能進(jìn)入肝細(xì)胞而很少能進(jìn)入肝竇間隙，更難進(jìn)入肝星狀細(xì)胞(HSC)，因此靶向肝星狀細(xì)胞(HSC)的藥物很少。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的發(fā)明人意外的發(fā)現(xiàn)，通過(guò)NOX1 siRNA進(jìn)行RNA干擾(RNAi)，可以有效靶向NOX1蛋白，抑制活性氧(ROS)的產(chǎn)生，有效抑制肝星狀細(xì)胞(HSC)的活化，進(jìn)而起到治療肝纖維化的作用。

本發(fā)明的技術(shù)方案為，一種抑制NOX1靶基因表達(dá)的小干擾RNA，其由正義鏈和與其反向互補(bǔ)的反義鏈組成，所述正義鏈具有5’-GAGAUGUGGGAUGAUCGUGACTT-3’的核苷酸序列，所述反義鏈具有5’-GUCACGAUCAUCCCACAUCUCTT-3’的核苷酸序列，所述反義鏈與所述靶基因上的區(qū)段反向互補(bǔ)。