[發(fā)明專(zhuān)利]豬偽狂犬病毒gBgD抗體檢測(cè)試劑盒及其制備方法和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011301810.2
• 申請(qǐng)日: 2020-11-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112462057A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-03-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 查銀河;周泉麗;舒建洪;陶思銳;童夏霞;陳勇鋒;盛敏成
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 浙江洪晟生物科技股份有限公司;浙江理工大學(xué)紹興生物醫(yī)藥研究院有限公司;浙江海隆生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/569
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明一方面公開(kāi)了一種豬偽狂犬病毒gBgD抗體檢測(cè)試劑盒，所述試劑盒能同時(shí)檢測(cè)豬偽狂犬病毒gB抗原抗體和gD抗原抗體，所述的試劑盒中的抗原包被板為同時(shí)包被有PRV?gB蛋白和PRV?gD蛋白的酶標(biāo)板。另一方，本發(fā)明還提供了一種制備所述試劑盒的方法，所述方法包括抗原包被板的制備、樣品稀釋液的配制與分裝、濃縮洗滌液的配制與分裝、酶標(biāo)抗體的配制與分裝、陽(yáng)性對(duì)照的制備、陰性對(duì)照的制備、質(zhì)控品1的制備、質(zhì)控品2的制備、質(zhì)控品3的制備、顯色液的分裝、終止液的配制與分裝。本發(fā)明的試劑盒能夠?qū)崿F(xiàn)同時(shí)檢測(cè)PRV?gB蛋白抗體和PRV?gD蛋白抗體，利于對(duì)整體PRV抗體效價(jià)的評(píng)價(jià)。另外本發(fā)明的試劑盒穩(wěn)定性好、靈敏度高、特異性強(qiáng)，能夠適用于大規(guī)模臨床檢測(cè)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于病毒疫病診斷技術(shù)和動(dòng)物檢疫領(lǐng)域，具體涉及一種豬偽狂犬病毒gBgD抗體檢測(cè)試劑盒及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

豬偽狂犬病是由豬偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)引起的豬的急性傳染病。該病在豬呈暴發(fā)性流行?？梢鹑焉锬肛i流產(chǎn)、死胎，公豬不育，新生仔豬大量死亡，育肥豬呼吸困難、生長(zhǎng)停滯等，是危害全球養(yǎng)豬業(yè)的重大傳染病之一。

偽狂犬病毒屬于皰疹病毒科(Herpesviridae)、豬皰疹病毒屬，病毒粒子為圓形，直徑150～ 180nm，核衣殼直徑為105～110nm。病毒粒子的最外層是病毒囊膜，它是由宿主細(xì)胞衍生而來(lái)的脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)。囊膜表面有長(zhǎng)約8～10nm呈放射狀排列的纖突。偽狂犬病毒基因組是線狀雙鏈DNA分子，大小約150kb，平均G+C含量高達(dá)74％，具有典型的皰疹病毒基因組結(jié)構(gòu)特征，由獨(dú)特長(zhǎng)區(qū)段、獨(dú)特短區(qū)段及位于US兩側(cè)的末端重復(fù)序列(TR)和內(nèi)部重復(fù)序列(IR)組成。目前已發(fā)現(xiàn)11種PRV糖蛋白，其中，gB、gC、gD均為刺激機(jī)體產(chǎn)生中和抗體的蛋白，所產(chǎn)生的抗體無(wú)論是在體內(nèi)、體外，還是在有無(wú)補(bǔ)體存在的情況下都有中和PRV的能力，因此，gB、 gC、gD是研制PRV亞單位疫苗以及評(píng)價(jià)疫苗免疫效果的首選糖蛋白，其中尤以gB和gD為最好。

但是，目前市面流行的用于評(píng)價(jià)PRV免疫效果的試劑盒都只能檢測(cè)gB蛋白產(chǎn)生的抗體，不能評(píng)價(jià)gD蛋白產(chǎn)生的抗體，因此對(duì)PRV疫苗免疫后的實(shí)際情況的評(píng)價(jià)可能存在一定的假陰性的檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容

為了彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的之一是提供一種能同時(shí)評(píng)價(jià)PRV-gB蛋白和 PRV-gD蛋白的抗體的試劑盒，以彌補(bǔ)現(xiàn)有試劑盒技術(shù)的不足。本發(fā)明的目的之二是提供了一種制備該試劑盒的方法。

因此，本發(fā)明一方面提供了一種豬偽狂犬病毒gBgD抗體檢測(cè)試劑盒，所述試劑盒能同時(shí)檢測(cè)豬偽狂犬病毒gB抗原抗體和gD抗原抗體，其特征在于，所述的試劑盒中的抗原包被板為同時(shí)包被有PRV-gB蛋白和PRV-gD蛋白的酶標(biāo)板。

優(yōu)選地，本發(fā)明所述的抗原包被板上PRV-gB蛋白和PRV-gD蛋白的包被濃度均為100ng/ 孔/100μL。

優(yōu)選地，本發(fā)明所述的試劑盒還包括：樣品稀釋液、濃縮洗滌液、酶標(biāo)抗體、顯色液、終止液、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、質(zhì)控品1、質(zhì)控品2和質(zhì)控品3；其中，所述的樣品稀釋液為含有2％BSA的1×PBST溶液；所述的濃縮洗滌液為25×PBST溶液，在使用前稀釋到1×PBST溶液；所述的酶標(biāo)抗體為羊抗豬IgG酶標(biāo)抗體；所述的顯色液為T(mén)MB單組分溶液；所述的終止液為2M的H2SO4溶液；所述的陽(yáng)性對(duì)照為PRV抗體OD450nm值在0.9～1.5之間的陽(yáng)性血清；所述的陰性對(duì)照為PRV抗體OD450nm值小于0.2的陰性血清；所述的質(zhì)控品1為 S/P值在1.5～2.0之間的強(qiáng)陽(yáng)性血清；所述的質(zhì)控品2為S/P值在0.5～1.0之間的弱陽(yáng)性血清；所述的質(zhì)控品3為S/P值小于0.35的陰性血清。

優(yōu)選地，本發(fā)明所述的陽(yáng)性對(duì)照為PRV抗體OD450nm值在1.0～1.2之間的陽(yáng)性血清。

優(yōu)選地，本發(fā)明所述的陰性對(duì)照為PRV抗體OD450nm小于0.1的陰性血清。