[發明專利]豬偽狂犬病毒gBgD抗體檢測試劑盒及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202011301810.2
• 申請日: 2020-11-23
• 公開（公告）號: CN112462057A
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發明（設計）人: 查銀河;周泉麗;舒建洪;陶思銳;童夏霞;陳勇鋒;盛敏成
• 申請（專利權）人: 浙江洪晟生物科技股份有限公司;浙江理工大學紹興生物醫藥研究院有限公司;浙江海隆生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種豬偽狂犬病毒gBgD抗體檢測試劑盒，所述試劑盒能同時檢測豬偽狂犬病毒gB抗原抗體和gD抗原抗體，其特征在于，所述的試劑盒中的抗原包被板為同時包被有PRV-gB蛋白和PRV-gD蛋白的酶標板。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的抗原包被板上PRV-gB蛋白和PRV-gD蛋白的包被濃度均為100ng/孔/100μL。

3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒還包括：樣品稀釋液、濃縮洗滌液、酶標抗體、顯色液、終止液、陽性對照、陰性對照、質控品1、質控品2和質控品3；其中，

所述的樣品稀釋液為含有2％BSA的1×PBST溶液；

所述的濃縮洗滌液為25×PBST溶液，在使用前稀釋到1×PBST溶液；

所述的酶標抗體為羊抗豬IgG酶標抗體；

所述的顯色液為TMB單組分溶液；

所述的終止液為2M的H₂SO₄溶液；

所述的陽性對照為PRV抗體OD450nm值在0.9～1.5之間的陽性血清；

所述的陰性對照為PRV抗體OD450nm值小于0.2的陰性血清；

所述的質控品1為S/P值在1.5～2.0之間的強陽性血清；

所述的質控品2為S/P值在0.5～1.0之間的弱陽性血清；

所述的質控品3為S/P值小于0.35的陰性血清。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述的陽性對照為PRV抗體OD450nm值在1.0～1.2之間的陽性血清。

5.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述的陰性對照為PRV抗體OD450nm小于0.1的陰性血清。

6.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述的陽性對照孔每孔OD450nm讀數大于0.5且各孔間最大差值應0.3，陰性對照孔每孔OD450nm讀數0.3，空白對照OD450nm讀數＜0.1，質控品1的S/P值在1.5～2.0之間，質控品2的S/P值在0.5～1.0之間，質控品3的S/P值＜0.35時，試驗成立，結果有效。

7.一種使用權利要求1至6任一權利要求所述的試劑盒對待檢樣品進行檢測的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

1)樣本稀釋：用樣品稀釋液將待檢樣本進行1:100倍稀釋；

2)加樣本：根據待檢樣品數量，取可拆卸包被板，平放桌面，加入稀釋好的待檢血清100μL/孔，同時設陽性對照、陰性對照各2孔，質控品1、質控品2、質控品3、空白對照各1孔；

3)孵育：置37℃溫箱孵育30分鐘；

4)洗滌：甩去孔內液體，加入洗滌液，300μL/孔，洗滌3～5次，每次靜置30秒，甩去孔內液體，拍干；

5)二抗孵育：對應孔中加入羊抗豬IgG酶標抗體，100μL/孔，置37℃溫箱孵育30分鐘；

6)洗滌：甩去孔內液體，加入洗滌液，300μL/孔，洗滌3～5次，每次靜置30秒，甩去孔內液體，拍干；

7)顯色：加入顯色液，100μL/孔，置37℃溫箱避光孵育10分鐘；

8)終止：加入終止液，50μL/孔，輕微震蕩混合均勻；

9)讀數：加入終止液后，立即將包被板置于酶標儀中，在波長為450nm下讀取OD450nm值；

10)S/P值計算：按照以下計算公式，計算S/P值：

11)試驗有效性斷判：陽性對照孔每孔OD450nm讀數應大于0.5且各孔間最大差值應0.3，陰性對照孔每孔OD450nm讀數應0.3，空白對照OD450nm讀數＜0.1，質控品1的S/P值在1.5～2.0之間，質控品2的S/P值在0.5～1.0之間，質控品3的S/P值＜0.35；

12)結果判定：當S/P值大于0.399時判為陽性；當S/P值小于等于0.399時判為陰性。