[發明專利]一種鴨病毒性肝炎病毒疫苗株、疫苗及疫苗制備方法

有效

• 申請號: 202011299990.5
• 申請日: 2020-11-18
• 公開（公告）號: CN112375747B
• 公開（公告）日: 2022-11-01
• 發明（設計）人: 陳生雷;劉艷霞;舒秀偉;李慧;吳冠辰;呂明凡;鄭鑫;徐囡
• 申請（專利權）人: 遼寧益康生物股份有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A61K39/125;A61P31/14;A61P1/16;C12R1/93
• 代理公司: 北京五洲洋和知識產權代理事務所(普通合伙) 11387
• 代理人: 榮紅穎;張洪生

本發明公開了一種用于治療、預防、減緩或控制鴨病毒性肝炎的鴨病毒性肝炎病毒疫苗株，包括微生物保藏號為CGMCC No.19696的Ⅰ型鴨病毒性肝炎病毒疫苗株和微生物保藏號為CGMCC No.19695的Ⅲ型鴨病毒性肝炎病毒疫苗株，該疫苗株免疫原性良好。本發明還公開了以前述疫苗株為免疫原的滅活疫苗組合物及其制備方法。該疫苗組合物特異性好，安全有效。

技術領域

本發明屬于生物制品領域，涉及一種鴨病毒性肝炎病毒疫苗株、疫苗及疫苗制備方法，特別涉及Ⅰ型鴨病毒性肝炎病毒和Ⅲ型鴨病毒性肝炎病毒單苗和二價滅活疫苗及制備方法。

背景技術

我國鴨存欄量每年約40億只。鴨病毒性肝炎(Duck viral hepatitis，DVH)是由鴨甲型肝炎病毒(Duck hepatitis A virus，DHAV)引起的雛鴨的急性、致死性傳染病，以發病急、肝腫大、出血和高度致死率為特征。主要感染21日齡以內的雛鴨，引起典型的肝炎癥狀，雛鴨死亡率高達80％以上，傳播迅速，呈廣泛性分布。DHV系小RNA病毒，屬無囊膜的單股正鏈RNA病毒。DHV有3個血清型，Ⅰ型(1型)、Ⅱ型(2型)和Ⅲ型(3型)，Ⅰ型(古典型)鴨病毒性肝炎病毒最早于1950年由Levine等從美國分離到，并分布于世界各養鴨國家；Ⅱ型鴨病毒性肝炎病毒最早于1956年從英國分離到，并且主要發生于英國，Ⅱ型病毒與Ⅰ型病毒無抗原相關性；Ⅲ型鴨病毒性肝炎病毒于1969年發現于美國紐約市長島地區，并一直局限于該地區，Ⅱ型和Ⅲ型病毒與Ⅰ型病毒無抗原關系。1963年我國黃均建等報道該病在上海地區的發生與流行情況，隨后許多省市陸續有該病的報道。

2008年，DHV被重新命名為鴨甲型肝炎病毒(Duck hepatitis A virus，DHAV)。DHAV分為A、B、C三個基因型，分別對應DHAV-1、DHAV-2、DHAV-3，具OIE報道亞洲主要流行鴨肝炎Ⅰ型及其變異株，即鴨甲肝病毒，該病主要危害3周齡以內雛鴨，發病急，死亡率高，尤其是1～2周齡的雛鴨發病率和死亡率較高，死亡率可達30％以上，是危害養鴨業重要傳染病之一。

該病全年任何季節都能夠發生，我國南方多在2-5月和9-10月間，北方多在4-8月間，其中主要發生于孵化季節，且只要發生就會在雛鴨群中快速傳播，發病率能夠達到100％。臨床上以發病急、傳播快、死亡率高，剖檢肝臟有明顯出血點和出血斑為特征。

在疫苗研究方面，研究人員就卵黃抗體和全病毒滅活疫苗以及致弱活疫苗進行了大量的研究工作。目前資料表明，研究人員或疫苗生產企業主要利用鴨胚、雞胚、鴨胚成纖維細胞等細胞增殖病毒。

發明內容

本發明提供了一種鴨病毒性肝炎二價滅活疫苗制備的方法及其疫苗，病毒接種所用細胞系為DF-1細胞系(雞胚成纖維細胞系)，病毒培養采用生物反應器以全懸浮方式培養；并經過1)毒種選育；2)建立毒種種子批；3)制備細胞毒液；4)滅活病毒；5)乳化等步驟完成疫苗的制備。

研究結果表明，利用鴨胚或雞胚進行培養的鴨病毒性肝炎病毒的病毒含量低，原輔料穩定性差，工藝復雜。

針對現有技術存在的問題，本研究的目的在于提供一種生產細胞源鴨病毒性肝炎二價滅活疫苗(Ⅰ型LSE株+Ⅲ型QZE株)的方法及其產品，該方法具有生產工藝穩定、批間差異小、質量可控、可顯著提高疫苗產量和質量的優點，利用本發明提供的方法生產出的疫苗具有較高品質，并降低生產成本。

本發明第一方面提供了一種用于治療、預防、減緩或控制鴨病毒性肝炎的鴨病毒性肝炎病毒疫苗株，所述鴨病毒性肝炎病毒疫苗株為Ⅰ型鴨病毒性肝炎病毒疫苗株和/或Ⅲ型鴨病毒性肝炎病毒疫苗株；

所述Ⅰ型鴨病毒性肝炎病毒疫苗株是微生物保藏號為CGMCC No.19696的病毒株，或其臨床致病性與免疫原性沒有變化的傳代病毒株或突變病毒株；

所述Ⅲ型鴨病毒性肝炎病毒疫苗株是微生物保藏號為CGMCC No.19695的病毒株，或其臨床致病性與免疫原性沒有變化的傳代病毒株或突變病毒株。