[發(fā)明專利]一種利用SERS技術(shù)對(duì)食品中OTA殘留的檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011298830.9
• 申請(qǐng)日: 2020-11-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112525882B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-05-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 顏朦朦;李敏;李慧冬;陳子雷;張文君;毛江勝;郭長(zhǎng)英;丁蕊艷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所
• 主分類號(hào): G01N21/65
• 分類號(hào): G01N21/65
• 代理公司: 濟(jì)南誠(chéng)智商標(biāo)專利事務(wù)所有限公司 37105
• 代理人: 房一粟

本發(fā)明公開(kāi)了一種利用SERS技術(shù)對(duì)食品中OTA殘留的檢測(cè)方法，本方法以膠體金納米材料作為SERS基底，結(jié)合能夠與待檢測(cè)目標(biāo)物赭曲霉毒素發(fā)生特異性競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合的納米探針，通過(guò)SERS檢測(cè)催化反應(yīng)產(chǎn)生的拉曼報(bào)告分子TMB²⁺的指紋圖譜信息來(lái)間接檢測(cè)OTA。本方法使用膠體金作為增強(qiáng)基底提高了檢測(cè)靈敏度，同時(shí)利用OTA能夠與OTA適配體特異性結(jié)合，形成穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)，提高了OTA適配體傳感器的選擇性和在實(shí)際樣品中的實(shí)用性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種利用SERS技術(shù)對(duì)食品中OTA殘留的檢測(cè)方法，屬于化學(xué)分析領(lǐng)域。

背景技術(shù)

葡萄酒作為一種酒精飲料,對(duì)眾多國(guó)家的經(jīng)濟(jì)貢獻(xiàn)是顯著的。然而,該商品容易被某些真菌產(chǎn)生的霉菌毒素所污染,其中最受關(guān)注的是赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)。赭曲霉毒素A是葡萄酒中主要存在的霉菌毒素,嚴(yán)重影響著人類的健康。因此,葡萄酒的風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)和暴露研究至關(guān)重要。赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)主要由曲霉屬或青霉屬的一些真菌產(chǎn)生,具有腎毒性、致畸性和致癌性。歐盟最早規(guī)定了葡萄酒中OTA的最大限量值為2.0ug/kg。

因此，迫切需要開(kāi)發(fā)一種簡(jiǎn)單，靈敏的方法來(lái)測(cè)定受污食品中的OTA。目前，OTA毒素的測(cè)定方法主要有兩大類：化學(xué)分析法和表面增強(qiáng)拉曼散射技術(shù)。薄層色譜法(TLC)、氣相色譜法(GC)、液相色譜法(LC)、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法(LC-MS)等這些化學(xué)分析方法準(zhǔn)確、靈敏，但是樣品通常需要復(fù)雜的前處理，費(fèi)時(shí)費(fèi)力；所用檢測(cè)設(shè)備昂貴，且需要專業(yè)的操作人員。表面增強(qiáng)拉曼散射(Surface-Enhanced Raman Scattering，簡(jiǎn)稱SERS)是一種具有單分子靈敏度的振動(dòng)光譜技術(shù)，其光譜數(shù)據(jù)中包含了豐富的物質(zhì)特征信息，與其他便攜式設(shè)備相比，其具有獨(dú)特的性能，首先，它是一種振動(dòng)光譜，它提供分析物的指紋信息；其次，水分子對(duì)SERS信號(hào)沒(méi)有干擾；第三，當(dāng)使用近紅外光作為激發(fā)光源時(shí)，SERS在復(fù)雜的樣品基質(zhì)(例如牛奶，果汁和血液)中具有深的穿透深度。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明克服了上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種利用SERS技術(shù)對(duì)食品中OTA殘留的檢測(cè)方法，本方法以膠體金納米材料作為SERS基底，結(jié)合能夠與待檢測(cè)目標(biāo)物赭曲霉毒素發(fā)生特異性競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合的納米探針，通過(guò)SERS檢測(cè)催化反應(yīng)產(chǎn)生的拉曼報(bào)告分子TMB²⁺的指紋圖譜信息來(lái)間接檢測(cè)OTA。

一種利用SERS技術(shù)對(duì)食品中OTA殘留的檢測(cè)方法，包括如下步驟：

1)制備納米金增強(qiáng)基底；

2)合成納米探針Pt-PdNPs-Apt溶液；

3)合成富集納米探針MNPs-CApt溶液；

4)將步驟2)合成的納米探針Pt-PdNPs-Apt溶液和步驟3)合成的富集納米探針MNPs-CApt溶液按照體積比2-2.5:1的比例混合，取40-50uL待檢樣品加入上述混合液中，反應(yīng)2-2.5h，然后磁性富集，加入40-50uL的TMB溶液，再加入480-500uL的AuNPs溶液，利用拉曼光譜檢測(cè)TMB指紋圖譜，獲得OTA檢測(cè)結(jié)果。

進(jìn)一步的，上述步驟1)中所述的制備納米金增強(qiáng)基底，包括如下步驟：取1-1.2％的氯金酸水溶液0.8-1mL用去離子水定容到100mL，加熱冷凝回流攪拌加熱至沸騰且有連續(xù)水滴滴下，快速加入0.8-1mL的1-1.2％的檸檬酸三鈉水溶液，顏色保持不變后繼續(xù)加熱沸騰8-10min，冷卻到室溫，獲得納米金增強(qiáng)基底。